ApoLive-Glo™ Multiplex Assay

ApoLive-Glo™ MultiplexAssayは細胞生存マーカーとして生細胞プロテアーゼを、アポトーシスマーカーとしてカスパーゼの活性化を1ウェルで測定するシステムで、細胞死のメカニズムを決定することができます。アッセイの最初に細胞生存性に対するプロテアーゼマーカーの活性を測定します。生細胞プロテアーゼ活性はインタクトな生存細胞にのみ存在し、細胞透過性の蛍光ペプチド基質(glycyl-phenylalanyl-aminofluorocoumarin;GF-AFC)で測定します。基質はインタクトな細胞に透過すると生細胞プロテアーゼ活性により切断されることにより生細胞数に比例した蛍光シグナルが生じます。この生細胞プロテアーゼは細胞膜の完全性が失われて培地に漏出すると不活性化されます。次にアポトーシスの鍵となるバイオマーカーであるカスパーゼの活性をCaspase-Glo®Assayテクノロジーにより検出します。Caspase-Glo®Assayではテトラペプチド配列DEVDを含むcaspase-3/7発光基質がカスパーゼ活性、ルシフェラーゼ活性、細胞溶解に最適化された試薬として供給されます。簡便な“添加-混和-測定” フォーマットでCaspase-Glo®3/7Reagentが添加されると細胞が溶解され、カスパーゼによる基質の切断後、ルシフェ ラーゼによるグロー発光を生じます。この発光シグナルは存在するカスパーゼ活性に比例します。

• 同一ウェル内で生存性とアポトーシスを測定：より短時間、少量サンプルで細胞死のメカニズムを決定
• 簡便：シンプルで連続的な“添加-混和-測定”フォーマットによるアッセイ
• 生存性コントロールによるカスパーゼデータの補正：カスパーゼ活性と生存細胞の比率はカスパーゼ活性化量の決定および細胞数に対する補正に有用
• 柔軟性と自動化への適応性：各アッセイはスケール変更が可能で96、384ウェルプレートでの自動アッセイも可能
• カスパーゼ活性ウインドウを外れても細胞死を検出可能
• さらなるマルチアッセイ：第1段階のアッセイが非細胞溶解性であるため波長の異なる蛍光アッセイケミストリーとの組み合わせも可能

• 細胞死メカニズムの決定
• 細胞死リスクに対する化合物のプロファイリング