CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assay
A Cell Viability Assay Validated for 3D Microtissue Cultures
- Accurate 3D cytotoxicity determination
- Easy assay implementation
- Simple, 30-minute protocol
Catalog Number:
Size
Catalog Number: G9681
Catalog Number: G9682
Catalog Number: G9683
CellTiter-Glo 3D はどのように機能する？
CellTiter-Glo®3D Cell Viability Assay は3次元培養細胞（微小組織、スフェロイドなど）の細胞生存性を測定するためにデザインされています。大きなスフェロイドにも試薬が浸透するように細胞溶解能力を強化しているため、他のアッセイ法比べてより精度の高い細胞生存性を測定することができます。
従来の CellTiter-Glo® Assay と同様に細胞内ATPを指標として生存率を評価し、発光シグナルを生成します。この発光シグナルは、比色法や蛍光法と比較してはるかに高感度であり、より正確な定量が可能です。さらに、30分で完了するシンプルなプロトコルとそのまま使える試薬により、迅速な結果取得が可能です。
CellTiter-Glo®3D Cell Viability Assay を使用して、オルガノイドにおける薬剤毒性を評価する方法をご紹介します。
より大きな３次元培養細胞からの効率的な ATP 抽出
| Diameter of Spheroid (μm) | Classic CellTiter-Glo® Assay (pmol/microtissue) | CellTiter-Glo® 3D Assay (pmol/microtissue) | Ratio |
|---|---|---|---|
| 188 | 16 ± 4 | 17 ± 4 | 1.10 |
| 386 | 79 ± 3 | 94 ± 11 | 1.19 |
| 459 | 103 ± 2 | 126 ± 11 | 1.22 |
| 565 | 127 ± 3 | 178 ± 17 | 1.40 |
強化された細胞溶解力
3次元培養細胞への浸透力向上により正確な細胞生存試験が可能に
HCT116大腸がんスフェロイドは、InSphero GravityPLUS™ 96ウェルハンギングドロッププレートに細胞を播種し、4日間培養して形成した。
パネルA 全サンプルに等量のアッセイ試薬を添加し、5分間シェイク後、30分時点で発光を測定した。
パネルB CellTiter-Glo® 3D Reagent（左）または ATPlite™ 1Step Reagent（右）に CellTox™ Green Dyepriorを2倍濃度であらかじめ添加し、細胞溶解の指標として使用した。サンプルを加えた後、30分時点で画像を取得した。パネルBに示すスフェロイドの直径は約300μmであり、各画像中のスケールバーは200μmを示す。
発色法または蛍光法よりも高感度な細胞生存試験
CellTiter-Glo® 3D Assay によって得られる発光シグナルは、バックグラウンドと比較して桁違いに高い値を示しました。一方で、蛍光（例：alamarBlue®）や吸光度（例：MTT）の変化を指標とする非溶解型の細胞生存率アッセイでは、無細胞コントロールに対してわずかに高い程度のシグナルしか得られませんでした。
InSphero Insight™ ヒト肝臓マイクロティッシュ（直径約250μm）。すべてのマイクロティッシュに対し、CellTiter-Glo® 3D、alamarBlue®、MTTアッセイを用いて、各製造元のプロトコールに従って評価を実施した。各アッセイの総所要時間は、CellTiter-Glo® 3Dが30分、alamarBlue®が3時間、MTTアッセイが8時間である。
HCT116大腸がん細胞をInSphero GravityPLUS™ 96ウェルハンギングドロッププレートに播種し、直径約340μmのスフェロイドを形成するまで培養した。
様々な３次元培養細胞での比較
ハンギングドロップ、超低接着プレート (ULA) および マトリゲル3 次元培養で CellTiter-Glo® 3D Assay による化合物スクリーニグを行った結果。３つ全ての方法で同等の結果が得られた。
HCT116大腸がん細胞を以下の条件で播種した︓ハンギングドロップでは400細胞、ULAまたはMatrigel®では1,000細胞。マイクロティッシュを4日間培養後、化合物で48時間処理し、CellTiter-Glo® 3D試薬を用いてアッセイを実施した。発光は30分後に測定した。
CellTiter-Glo® 3D Assayが実証する高い再現性
3DマイクロティッシュにおけるZ'-factor検証実験
HCT116大腸がん細胞を1ウェルあたり400細胞の条件で、InSphero GravityPLUS™ 96ウェルハンギングドロッププレートの60ウェルに播種し、4日間培養して直径約350μmのスフェロイドを形成した。60個のスフェロイドのうち半数には100μM panobinostat（黒四角）、残りの半数にはビークル（1% DMSO、オレンジ四角）を処理した。48時間後、すべてのサンプルに対してCellTiter-Glo® 3D試薬を用いたアッセイを実施した。CellTiter-Glo® 3D Assay によって得られた Z'-factor は 0.81 であった。
3D培養における生物学的変化のモニタリングツール
3D細胞培養モデルを扱う際には、適切なアッセイ系の選択が極めて重要です。本eBookでは、3D培養系における細胞の生存性、毒性、代謝活性、シグナル伝達などをモニタリングするためのツールをご紹介します。
バイオルミネッセンスリソースセンター
バイオルミネッセンス（発光）の仕組みや、フルオレッセンス（蛍光）との違い、そしてルミネッセンスをどのようにご自身の研究に活用できるかをご紹介します。
Protocols
Complete Protocol
Quick Protocols
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 3D Reagent |
G968A | 1 × 10ml |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 3D Reagent |
G968A | 10 × 10ml |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 3D Reagent |
G968B | 1 × 100ml |
Resources
技術記事
- Reproducible Drug Screening Assays Using Single Organoids
- Verifying Cell-Based Assays for Use with 3D Models
- Luminescent Viability Assays for Magnetically Bioprinted Hepatocyte Spheroids
- App Note: Predicting gastrointestinal toxicity
- Enhanced extrinsic apoptosis of therapy-induced senescent cancer cells using a death receptor 5 (DR5) selective agonist
- Lipidomics profiling reveals differential alterations after FAS inhibition in 3D colon cancer cell culture models
- ALDOC- and ENO2- driven glucose metabolism sustains 3D tumor spheroids growth regardless of nutrient environmental conditions: A multi-omics analysis
- High-pressure oxygen rewires glucose metabolism of patient-derived glioblastoma cells and fuels inflammasome response
- Delivery of a BET protein degrader via a CEACAM6-targeted antibody–drug conjugate inhibits tumour growth in pancreatic cancer models
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