CellTiter-Glo® 2.0 Cell Viability Assay
毎日の実験に使いやすい、迅速で簡便な発光式細胞生存率アッセイ
- 代謝活性を持つ細胞の普遍的なバイオマーカーであるATPを測定し、培養中の生細胞数を定量
- 基質の再溶解が不要な、そのまま使える単一試薬による調製時間とばらつきの低減
- 従来のCellTiter-Glo® Assayより優れた安定性と、4°Cで複数日にわたり繰り返し使用できる利便性
- 半減期5時間以上のグロー型発光シグナルによる、柔軟なバッチ処理および自動プレート処理
- 従来品と同等の感度およびダイナミックレンジ：5桁の範囲で約15～100細胞／ウェルまで検出
- ハイスループットスクリーニング（HTS）、自動化、マルチプレックスワークフローへの最適化
- 96、384、1536ウェルフォーマットへの対応およびMyGlo® Reagent Readerとの連携
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Catalog Number: G9242
Catalog Number: G9243
CellTiter-Glo® 2.0 Assayとは？測定原理は？
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、生細胞における主要なエネルギー源であり、代謝活性の直接的な指標でもあるアデノシン三リン酸（ATP）を定量することで、培養中の生細胞数を測定する均一系の発光式細胞生存率アッセイです。従来のCellTiter-Glo® Assayと同じ、実績あるルシフェラーゼベースの生物発光反応を採用しながら、利便性、安定性、処理能力を向上させるため、そのまま使用できる単一試薬として再設計されています。
CellTiter-Glo® 2.0 Reagentを細胞に添加すると、細胞溶解とルシフェラーゼ–ルシフェリン反応が同時に進行し、グロー型の発光シグナルが生じます。発光量は存在するATP量に比例し、ATP量は生細胞数を反映します。試薬を1回添加するだけで、約10分後に結果が得られます。
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、代謝活性を持つ細胞の存在を示すATPを定量することで、培養中の生細胞数を測定する。発光シグナルは、培養中の生細胞数に比例する。
CellTiter-Glo® 2.0 Assayが開発された理由
従来のCellTiter-Glo® Assayでは、使用前に凍結乾燥基質を専用バッファーで再溶解する必要があり、調製後の試薬を保存できる期間が限られていました。CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、この制約を解消するために再設計されています。そのまま使える試薬にすることで再溶解工程を不要にし、4°Cで複数日にわたって安定性を維持します。繰り返し測定や大規模なスクリーニングを行うラボのワークフローを簡素化できます。
従来のCellTiter-Glo® Assayとの主な違い
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、従来品と同等の感度、ダイナミックレンジ、発光シグナルを維持しながら、単一試薬による操作の簡略化、試薬安定性の向上、複数日にわたるハイスループットワークフローへの適合という、3つの実用的な改良を実現しています。
| Feature | CellTiter-Glo® (Original) Assay | CellTiter-Glo® 2.0 Assay |
|---|---|---|
| Reagent format | Two-component: lyophilized substrate + buffer (requires reconstitution) | Single, ready-to-use solution (no reconstitution required) |
| Preparation time | ~30min (substrate reconstitution + equilibration) | ~15min (equilibration only) |
| Reagent stability (4°C) | Reconstituted: 48h (~5% loss); 4d (~20% loss) | Stable for repeated use over multiple days at 4°C |
| Sensitivity | Detects as few as 15 cells/well (384-well format) | Detects as few as 15 cells/well (384-well format) |
| Linear dynamic range | Up to 5 logs | Up to 5 logs |
| Signal type | Glow-type; >5h half-life | Glow-type; >5h half-life |
| HTS/automation | Yes: compatible with 96/384/1536-well formats | Yes: optimized for repeated batch use and automation |
| Multiplex compatibility | Standard | Improved; recommended for multiplex workflows |
| Best use case | Standard single-run viability and cytotoxicity assays | High-throughput, multi-day screening campaigns, automation |
CellTiter-Glo® 2.0 Assayではデータの再現性が向上しますか？
感度、直線性、シグナル安定性などのデータ品質は、従来品と同等です。CellTiter-Glo® 2.0 Assayにおける再現性の向上は、主に操作面によるものです。基質の再溶解工程をなくすことで、異なる使用者が異なるタイミングで試薬を調製することによる、プレート間のばらつきを低減できます。また、安定性に優れたそのまま使える試薬であるため、スクリーニング初日と5日目でも一貫した性能が得られます。
従来品と試薬の互換性はありますか？
CellTiter-Glo® AssayとCellTiter-Glo® 2.0 Assayの試薬を混合しないでください。両製品には異なる安定化システムが使用されているため、混合するとシグナル特性を予測できなくなる可能性があります。バリデーション済みのアッセイを従来品から2.0へ移行する場合は、完全に切り替える前に並行比較試験を行い、使用する細胞モデルとアッセイフォーマットで同等性を確認することを推奨します。
従来品より速く結果が得られますか？
試薬の添加から発光測定までのアッセイ時間は同等で、約10～12分です。CellTiter-Glo® 2.0 Assayでは再溶解が不要なため、1回の測定につき準備時間を約15～30分短縮できます。複数日にわたるスクリーニングでは、大幅な時間短縮につながります。
シンプルなアッセイ操作と優れた安定性
そのまま使える単一試薬と、シンプルな「添加－混和－測定」プロトコルにより、試薬成分を混合する必要はありません。
CellTiter-Glo® 2.0 Reagentは室温および4°Cで安定しているため、迅速かつ簡単にアッセイを開始できます。他のATPアッセイで必要となる融解や混合の工程が不要です。安定性の向上により、保存も容易です。
| 残存活性 | CellTiter-Glo® 2.0 試薬安定性 | CellTiter-Glo® "オリジナル" 試薬安定性 |
|---|---|---|
| >22°Cで85% 活性 | 7 日 | 12 時間 |
| >4°Cで85% 活性 | 2カ月 | 3.5 日 |
アッセイパフォーマンス
CellTiter-Glo® 2.0 Cell Viability Assayは、従来のCellTiter-Glo® Assayと同等の高い性能を備えており、ベンチトップでの測定からハイスループットスクリーニングまで幅広く使用できます。
高感度かつ広い直線範囲： 96、384、1536ウェルプレートのいずれにおいても、CellTiter-Glo® 2.0 Assayで測定した発光量は、3桁の範囲にわたり培養中のJurkat生細胞数に比例する。
高感度なアッセイ系は低い細胞密度においても安定した測定を可能にする Jurkat細胞を白色の96ウェルプレートにおいて、400、2,000、10,000細胞/ウェルで播種し、ボルテゾミブで20時間処理した。生存性はCellTiter-Glo® 2.0および MyGlo™ Reagent Readerを用いて測定した。
他の細胞生存率・細胞毒性アッセイとのマルチプレックス
CellTiter-Glo® 2.0 Cell Viability Assayは、他のアッセイとマルチプレックス測定できるため、細胞培養にかかるコストと作業量を削減できます。同じサンプルウェルで複数のアッセイを行うことで、細胞の健康状態を相補的に測定でき、培養、プレーティング、アッセイ反応への干渉による誤差を補正できます。
この例では、Bortezomibで48時間処理したK562細胞にCellTox™ Green Cytotoxicity Assay Reagentを添加し、細胞毒性に伴う蛍光を測定しました。その後、CellTiter-Glo® 2.0 Assay Reagentを添加し、細胞増殖の指標として発光を測定しました。
導入事例
ミトコンドリア機能障害に対応した自動化アッセイワークフロー
課題：
ストラスクライド大学のリサーチフェローであるLouise Young博士は、ミトコンドリアがアルツハイマー病およびがんにおいて果たす役割を研究しています。彼女のチームでは、ROS（活性酸素種）産生量を正確かつ再現性高く測定しながら、ROSレベルを低下させる化合物をスクリーニングできる信頼性の高い手法を必要としていました。しかし、従来のアッセイでは洗浄ステップが必要なため、結果にばらつきが生じるという問題がありました。
結果：
ROS-Glo™ H2O2 Assay を使用することで、洗浄不要のプロトコールにより処理時間が短縮され、発光によるシグナル読み取りにより再現性が向上し、データ収集の効率も大幅に改善されました。
ワークフローにはさらに、アポトーシスおよびネクローシスを評価する RealTime-Glo™ Annexin V Assay と、細胞生存性を測定する CellTiter-Glo® 2.0 Assay も組み込まれています。いくつかの化合物ではROSレベルの有意な低下が確認され、今後の標的タンパク質の解明に向けた研究の指針となりました。
MyGlo® Reagent Readerとの組み合わせ
アッセイ結果を測定するために、共用のプレートリーダーを使用する必要はありません。MyGlo® Reagent Readerは、コンパクトな96ウェル発光プレートリーダーです。装置の空きを待つことなく、実験台で発光アッセイを実施できます。搭載ソフトウェアを使用して、用量反応曲線、単一濃度解析、直線性解析を数分で作成できます。
プロトコル
Complete Protocol
Quick Protocols
よくあるご質問
CellTiter-Glo® 2.0と従来のCellTiter-Glo® Assayの主な違いは何ですか？
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、そのまま使える単一の液状試薬を採用し、従来の2コンポーネントキットで必要だった基質の再溶解工程を不要にしました。また、4°Cで複数日にわたり安定しているため、長期間のスクリーニングで繰り返し使用する場合に適しています。アッセイ感度、ダイナミックレンジ、シグナル半減期は従来品と同等です。
| Feature | CellTiter-Glo® (Original) Assay | CellTiter-Glo® 2.0 Assay |
|---|---|---|
| Reagent format | Two-component: lyophilized substrate + buffer (requires reconstitution) | Single, ready-to-use solution (no reconstitution required) |
| Preparation time | ~30min (substrate reconstitution + equilibration) | ~15min (equilibration only) |
| Reagent stability (4°C) | Reconstituted: 48h (~5% loss); 4d (~20% loss) | Stable for repeated use over multiple days at 4°C |
| Sensitivity | Detects as few as 15 cells/well (384-well format) | Detects as few as 15 cells/well (384-well format) |
| Linear dynamic range | Up to 5 logs | Up to 5 logs |
| Signal type | Glow-type; >5h half-life | Glow-type; >5h half-life |
| HTS/automation | Yes: compatible with 96/384/1536-well formats | Yes: optimized for repeated batch use and automation |
| Multiplex compatibility | Standard | Improved; recommended for multiplex workflows |
| Best use case | Standard single-run viability and cytotoxicity assays | High-throughput, multi-day screening campaigns, automation |
CellTiter-Glo® 2.0 Assayの感度は従来品と同じですか？
はい。CellTiter-Glo® 2.0 Assayは従来品と同等の高感度を維持しており、プレートフォーマットに応じて約15～100細胞/ウェルまで検出できます。リニアダイナミックレンジは最大5桁です。今回の再設計では、基本的なアッセイ反応を変更することなく、安定性とワークフローを改善しています。
CellTiter-Glo® 2.0 Assayの安定性は従来品と比べてどうですか？
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、開封後も4°Cで保存すれば、複数日にわたって繰り返し使用できます。従来のCellTiter-Glo® Reagentは、再溶解後、4°Cで48時間保存した場合にシグナルが約5％、4日間保存した場合には約20％低下するため、使用時期に合わせて調製する必要があります。
ハイスループットスクリーニングにはどちらが推奨されますか？
ハイスループットスクリーニングおよび自動化ワークフローには、CellTiter-Glo® 2.0 Assayを推奨します。そのまま使える試薬はロボット式リキッドハンドラーとの親和性が高く、試薬調製に伴うバッチ間のばらつきを抑えられます。また、測定のたびに新しい試薬を調製することなく、複数日にわたるプレート測定でも一貫した性能を維持できます。
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは3D細胞培養に使用できますか？
CellTiter-Glo® 2.0 Assayは、3Dスフェロイドやオルガノイドモデル用には最適化されていません。3D培養には、CellTiter-Glo® 3D Cell Viability Assayを推奨します。このアッセイには、3D腫瘍スフェロイド内部まで浸透し、スフェロイド全体の細胞からATPを放出できるように設計された、溶解力の高いバッファーが使用されています。
ハイスループット創薬スクリーニングに最適な細胞生存率アッセイはどれですか？
CellTiter-Glo® 2.0 AssayなどのATPベースの発光アッセイは、高感度（15～100細胞/ウェルを検出）、シンプルなプロトコル（試薬を1回添加し、10分後に測定）、プレートフォーマット間での低い変動係数という特長があり、HTS創薬スクリーニングに適しています。比色アッセイ（MTT、MTS）では追加の操作工程が必要となり、微量化した条件では感度も低くなります。
CellTiter-Glo® 2.0と従来品では価格に違いがありますか？
CellTiter-Glo® 2.0の標準価格は、改良された試薬組成とそのまま使える試薬形態を反映し、容量当たりでは従来品より若干高く設定されています。ただし、ハイスループット測定を行うラボでは、再溶解工程を省略できることによる時間短縮や、同じ試薬を複数日にわたって使用できることにより、アッセイ当たりの価格差を相殺できる可能性があります。大容量での価格については、Promega担当者にお問い合わせください。
プレート間でCellTiter-Glo® 2.0のシグナルが安定しない場合は、どうすればよいですか？
プレート間でシグナルがばらつく主な原因として、次の点が考えられます。
- 添加時におけるプレートと試薬の温度差：混合前に両方を室温で30分間平衡化
- 細胞溶解の不足：混合時間または混合速度の増加
- 安定した測定時間外でのシグナル測定：シグナル安定化後10分～1時間以内での測定
- プレート色による発光強度への影響：白色ウェルプレートの使用確認
製品仕様
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 2.0 Reagent |
G924A | 1 × 10ml |
SDS
Search for SDS分析証明書
使用制限
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.保存条件
See Protocol for detailed storage recommendations.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 2.0 Reagent |
G924B | 1 × 100ml |
SDS
Search for SDS分析証明書
使用制限
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.保存条件
See Protocol for detailed storage recommendations.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
CellTiter-Glo® 2.0 Reagent |
G924C | 1 × 500ml |
SDS
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使用制限
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.保存条件
See Protocol for detailed storage recommendations.
関連製品
|
Cell Viability (ATP) |
Cell Viability (ATP) |
3D Cell Viability (ATP) |
Real-Time Viability |
Non-Lytic Viability |
Cell Proliferation |
|
|---|---|---|---|---|---|---|
| Best Use | Routine viability & HTS screening | Established protocols using original formulation | 3D spheroids, organoids, microtissues | Kinetic monitoring over time; downstream multiplexing | Multiplex first step; cells needed for follow-up assays | True proliferation readout independent of metabolism |
| Key Decision Points | ||||||
| Measures | Viability | Viability | Viability (3D) | Viability (kinetic) | Viability | Proliferation |
| Cells alive after assay? | ✗ Lytic | ✗ Lytic | ✗ Lytic | ✓ Non-lytic | ✓ Non-lytic | ✗ Lytic |
| Multiplexing compatible? | LimitedLytic—must be terminal step | LimitedLytic—must be terminal step | LimitedLytic—must be terminal step | ✓ ExcellentNon-lytic; pair with any downstream assay | ✓ ExcellentNon-lytic; pair with Caspase-Glo®, CTG, etc. | ModerateCan multiplex with CellTox™ Green or other fluorescent readouts |
| Real-time monitoring? | ✗ Endpoint | ✗ Endpoint | ✗ Endpoint | ✓ Up to 72hRead same wells repeatedly | ✗ Endpoint | ✗ Endpoint |
| 3D culture compatible? | PartialWorks for small spheroids; use 3D version for dense structures | PartialSame as 2.0 | ✓ OptimizedEnhanced lysis for dense 3D structures | PartialSubstrate must penetrate; best for small/loose 3D models | PartialSubstrate access may be limited in dense 3D | ✓ YesDetects Ki-67 in cell lysates from any culture format |
| Assay Attributes | ||||||
| Assay Principle | ATP quantitation (luciferase/luciferin) | ATP quantitation (luciferase/luciferin) | ATP quantitation (enhanced lysis for 3D) | Metabolic reduction of pro-substrate to luciferase substrate | Live-cell protease activity (GF-AFC cleavage) | Ki-67 immunodetection via NanoBiT® complementation |
| Detection Mode | Luminescence | Luminescence | Luminescence | Luminescence | Fluorescence400Ex / 505Em | Luminescence |
| Reagent Format | Ready-to-use liquid | Buffer + lyophilized substrateRequires reconstitution | Ready-to-use liquid | 2 components(enzyme + substrate) | Single reagent | Antibody mix + detection reagent |
| Time to Result | 10min | 10min | ~30min | ContinuousFirst read: 1–2h after addition | 30min | ~2h |
| Practical Considerations | ||||||
| Plate Formats | 96, 384, 1536 | 96, 384, 1536 | 96, 384 | 96, 384 | 96, 384 | 96, 384 |
| HTS Suitability | ✓ Excellent1536-well capable; fast protocol | ✓ Excellent1536-well capable | ✓ Good | ModerateRequires kinetic reader scheduling | ✓ Good | ✓ Good |
| Sensitivity (96-well) | ~15 cells/well | ~10 cells/well | Spheroid-dependent | <100 cells/well | ~40 cells/well | Cell line-dependent |
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