SignaTECT® Protein Kinase Assay Systems

SignaTECT® Protein Kinase Assay Systemには特殊なSAM2®Biotin Capture Membraneが含まれており、タンパク質キナーゼ測定のための他の放射性技術よりも優れた利点があります。SAM2®Membranesは基質に対し、高い結合能と特異性を持つため、従来のP-81ホスホセルロースを用いた結合/測定法と比較し、低バックグラウンドと高S/N比を示します。切り離し可能で96までの番号が付いたメンブレンを使用し、1～96サンプルのキナーゼ反応を測定できます。SAM2®Membrane測定法は、他のキナーゼ活性測定法のような煩雑な操作が不要です。キナーゼ反応終了後、反応溶液をSAM2®Membrane上にスポットし、一連の洗浄操作を行って非特異的標識を除去するだけです。全操作は1時間以内に終了します。さらに、SAM2®Membraneの特性により、他の方法では不可能な様々なバッファーや反応条件(例、細胞抽出液)で測定できます。さらに、高結合能によりSignaTECT®Protein Kinase Assay Systemsを用いて反応速度解析をすることができます。
それぞれのシステムには、目的のキナーゼに対する特異性の高いビオチン標識ペプチド基質と、その他タンパク質キナーゼアッセイに必要な試薬がすべて含まれていますが、[γ–32P]ATPは別途準備する必要があります。

 Protocols & Applications Guide もご参照ください。

【Tips】SignaTECT テクニカルチップス

Method Overview

After the kinase reaction is complete, the biotinylated, ³²P-labeled substrate is recovered from the reaction mix using the SAM²® Biotin Capture Membrane. After samples are spotted onto the SAM²® Membrane a series of short washes are performed to remove nonspecific label. The process is complete in less than 1 hour. The SAM²® Membrane is prenumbered and partially cut so that individual squares can be easily identified, separated and placed in scintillation vials. Alternatively, the intact SAM²® Membrane can be analyzed by phosphorimaging or conventional autoradiography.

Advantages of the SAM²® Membranes

• High binding capacity and high specificity characteristics produce lower backgrounds and higher signal-to-noise ratios compared to the traditional P81 phosphocellulose method of capture and measurement.
• The perforated and numbered membrane allows researchers to measure from 1 up to 96 kinase reactions and does not require as much "hands-on" manipulation as other methods used to measure kinase activity.
• Can be used under a variety of buffer/reaction conditions (e.g., cell extracts), which many other methods do not allow.
• High binding capacity allows use of the SignaTECT® Systems for kinetic studies.