pHAb Reactive Dyes
Measure Antibody Internalization in Real Time
- Compatible with 96-well, plate-based assay
- High signal-to-background ratios
- On-bead conjugation
Catalog Number:
Choose a conjugation option
Size
Catalog Number: G9841
Catalog Number: G9831
Catalog Number: G9835
Catalog Number: G9845
抗体インターナリゼーションのためのスクリーニング
pHAb Dyes は 溶液が酸性になることで蛍光が飛躍的に強くなるセンサー色素で pH 7 以上でほほとんど蛍光を生じません。pHAb Dyes の最大励起波長 (Ex) は 532nm、最大蛍光波長 (Em) は 560nm です。
この特殊な色素は 抗体標識のために特別にデザインされており、抗体のインターナリゼーションスクリーニグアッセイをハイスループットで行うことができます。
Development of a Novel Anti-CD19 Antibody-Drug Conjugate
B-cell lymphoma is a cancer in need of a therapy. Patients with B-cell lymphoma often respond to first line therapies, but tumor recurrence rate is high and prognosis often poor. Novel approaches to B-cell lymphoma treatment are needed.
CD19 is a B-cell transmembrane glycoprotein that plays a key role in B-cell malignancies and autoimmune diseases and is a target of interest for new B-cell lymphoma therapies. Of the anti-CD19 therapies in development and/or clinical trials, antibody-drug conjugates (ADCs) are some of the most promising, as they are both specific and toxic. In the ADC mechanism of action, the antibody binds CD19 on the B-cell surface stimulating internalization of the antibody-receptor complex. Upon internalization toxin is released, killing the tumor cell.
In this work, Li et al. created a novel CD19-binding monoclonal antibody, RC58 . They used pHAb Amine Reactive dyes to analyze internalization of the RC58 antibody.
Details of their work can be found in this 2018 International Immunopharmacology paper: "Development of novel anti-CD19 antibody-drug conjugates for B-cell lymphoma treatment".
pHAb アミン反応性色素
HAb Reactive Dyes は 抗体に付加するために異なる反応基をもつ2種類のタイプ pHAb Amine Reactive Dye と pHAb Thiol Reactive Dye を揃えています。
pHAb Amine Reactive Dye はスクシンイミジルエステル基を有しており、 抗体上のリジンアミノ酸の第一級アミンと反応します 。
pHAb チオール基反応性色素
pHAb Thiol Reactive Dye はマレイミド基を有しており、チオールと反応します。このマレイミド基は、ヒンジ領域のシステイン残基ジスルフィド結合をDTTまたはTCEPなどでチオールに還元した抗体に付加されます。
抗体インターナリゼーションのモニタリング
pHAb Dyes の主な特長は1蛍光色素あたり2つのスルホン酸基を持っており、これにより溶解度が向上し、他の非スルホン酸化色素でみられる凝集を低減します。 pHAb DyesのpHの変化に対する蛍光応答性は抗体に付加後でも維持されます。
抗体への付加が主な用途ですが、リジンの第一級アミンを含むタンパク質またはシステイン上のチオールであればpHAb Dyeを付加することができます。
抗体に pHAb Reactive Dye を結合させる2つの方法とは
抗体への pHAb Reactive Dyes 修飾方法には、従来の溶液中での修飾法とビーズ上での修飾法の 2つのオプションがあります。
従来の溶液中での抗体修飾
ビーズ上での抗体修飾
pHAb Reactive Dyes は修飾した後でもpH に対する蛍光応答性を維持
pHAb Dye で修飾した抗体は受容体を介した抗体のインターナリゼーションのモニタリングに使用することができます。この修飾抗体が細胞膜上の受容体に結合すると最小レベルの蛍光は示しますが、受容体を介したインターナリゼーションが起こるとこの抗体は酸性を示すエンドソームおよびリソソームの小胞内に送られることで強い蛍光を示します。この蛍光は適切なフィルターを用いてることで細胞イメージング、フローサイトメトリーあるいは蛍光プレートプレートリーダーなどで検出することができます。
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
pHAb Amine Reactive Dye |
G984A | 1 × 250μg |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
pHAb Thiol Reactive Dye |
G983A | 1 × 250μg |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
pHAb Thiol Reactive Dye |
G983A | 4 × 250μg |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
pHAb Amine Reactive Dye |
G984A | 4 × 250μg |
Resources
No related resources available
Related Products
関連製品
Magne® Protein G and Magne® Protein A Beads
培地、腹水、血清などのサンプルより抗体を精製するためのプロテインAまたはG 結合磁性体アフィニティービーズ。モノクローナルおよびポリクローナル抗体に対する固定化能が向上する新規な製法で製造
G7471, G7472, G7473, G8781, G8782, G8783
ADCC Reporter Bioassay, V Variant
高親和性ヒトFcγRIIIa-V受容体を介したADCC活性を持つ抗体の力価および安定性を評価
G7015, G7014, G7010, G7016, G7013, G7018, G7102, GA1130
PD-1/PD-L1 Blockade Bioassay
免疫チェックポイントシグナルを遮断するバイオロジックスの力価測定に
J1250, J1255, J1252, J1191, J1195, J1201
CellTiter-Glo® Luminescent Cell Viability Assay
ATP定量に基づく培養細胞の生存数測定
G7570, G7571, G7572, G7573
