pHAb Reactive Dyes

抗体インターナリゼーションのためのスクリーニング

pHAb Dyes は溶液が酸性になることで蛍光が飛躍的に強くなるセンサー色素で pH 7 以上でほほとんど蛍光を生じません。pHAb Dyes の最大励起波長 (Ex) は 532nm、最大蛍光波長 (Em) は 560nm です。

この特殊な色素は抗体標識のために特別にデザインされており、抗体のインターナリゼーションスクリーニグアッセイをハイスループットで行うことができます。

47960358-Li et al Intl Immunopharm. paper on antiCD19 mAb

Development of a Novel Anti-CD19 Antibody-Drug Conjugate

B-cell lymphoma is a cancer in need of a therapy. Patients with B-cell lymphoma often respond to first line therapies, but tumor recurrence rate is high and prognosis often poor. Novel approaches to B-cell lymphoma treatment are needed.

CD19 is a B-cell transmembrane glycoprotein that plays a key role in B-cell malignancies and autoimmune diseases and is a target of interest for new B-cell lymphoma therapies. Of the anti-CD19 therapies in development and/or clinical trials, antibody-drug conjugates (ADCs) are some of the most promising, as they are both specific and toxic. In the ADC mechanism of action, the antibody binds CD19 on the B-cell surface stimulating internalization of the antibody-receptor complex. Upon internalization toxin is released, killing the tumor cell.

In this work, Li et al. created a novel CD19-binding monoclonal antibody, RC58 . They used pHAb Amine Reactive dyes to analyze internalization of the RC58 antibody.

Details of their work can be found in this 2018 International Immunopharmacology paper: "Development of novel anti-CD19 antibody-drug conjugates for B-cell lymphoma treatment".

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pHAb アミン反応性色素

HAb Reactive Dyes は抗体に付加するために異なる反応基をもつ2種類のタイプ pHAb Amine Reactive Dye と pHAb Thiol Reactive Dye を揃えています。

pHAb Amine Reactive Dye はスクシンイミジルエステル基を有しており、抗体上のリジンアミノ酸の第一級アミンと反応します。

Chemical structure of the phAb Reactive Dye — For labeling amines of lysine residues on antibodies.

pHAb チオール基反応性色素

pHAb Thiol Reactive Dye はマレイミド基を有しており、チオールと反応します。このマレイミド基は、ヒンジ領域のシステイン残基ジスルフィド結合をDTTまたはTCEPなどでチオールに還元した抗体に付加されます。

抗体インターナリゼーションのモニタリング

pHAb Dyes の主な特長は1蛍光色素あたり2つのスルホン酸基を持っており、これにより溶解度が向上し、他の非スルホン酸化色素でみられる凝集を低減します。 pHAb DyesのpHの変化に対する蛍光応答性は抗体に付加後でも維持されます。

抗体への付加が主な用途ですが、リジンの第一級アミンを含むタンパク質またはシステイン上のチオールであればpHAb Dyeを付加することができます。

pHAb Reactive Dyes exhibit flourescence upon internalization — Fluorescence is shown as a function of pH for trastuzumab labeled with pHAb Amine Reactive Dye or pHAb Thiol Reactive Dye compared to pHAb Amine Reactive Dye or pHAb Thiol Reactive Dye alone.

抗体に pHAb Reactive Dye を結合させる2つの方法とは

抗体への pHAb Reactive Dyes 修飾方法には、従来の溶液中での修飾法とビーズ上での修飾法の 2つのオプションがあります。