P450-Glo™ CYP2C19 Assay は発光法を利用してシトクロムP450 CYP2C19 活性を測定するホモジニアスタイプのシステムです。このアッセイはルシフェラーゼ酵素の基質である甲虫ルシフェリンの誘導体である発光 P450 基質を採用しています。この誘導体は P450 により ルシフェリンに変換されることでルシフェラーゼの基質となり、 P450 活性に比例した発光を生じます。
この発光アッセイは非常に高感度でバックグラウンドも低く、広いダイナミックレンジを示します。P450の基質であるルシフェリン誘導体と安定化された組換えルシフェラーゼ (Ultra-Glo Luciferase) および特殊なバッファーシステムにより ”グロータイプ (長時間発光)” の発光シグナルを生じます。発光半減期は 2時間以上なのでインジェクターを備えたルミノメーターを使用する必要はなく、プレートのバッチ処理も可能です。発光測定フォーマットなので時間のかかる HPLC などの分析に比べ非常に簡便です。
ルシフェリンベースの基質は容易に細胞へ取り込まれ、細胞内でただちにルシフェリンに変換されるためインキュベーションも短時間（通常 30 - 60分）で終了します。シトクロム P450 阻害剤スクリーニングにおいて被験物質のルシフェラーゼ阻害による偽陽性も最小限に抑えられており、96- または 384-ウェルプレートフォーマットで得られる Z´ 値は 0.8 以上で信頼性の高い測定が可能です。
このアッセイには発光性 P450 基質、発光検出試薬、バッファーなどが含まれています。
P450-Glo™ CYP2C19 Screening System ：発光シトクロム P450 アッセイに必要な全ての試薬を供給します。このシステムにはヒト 組換えシトクロム P450 酵素を含むメンブレン、発光 P450 基質、NADPH 再生システム、反応バッファー、ルシフェリン検出試薬およびルシフェリンフリー水が含まれます。メンブレンはバキュロウイルス感染昆虫細胞より調製されヒト シトクロム P450、P450 リダクターゼおよびシトクロム b5を含みます。またP、450-Glo™ Screening System にはネガティブコントロールとしてシトクロム P450 活性のない膜画分も含まれます。このアッセイは薬剤や新規化合物のシトクロム P450 酵素活性への影響をテストするのに最適なアッセイです。
【カルタヘナ】対像品 (Screening System のみ)
【Q&A】 P450-Glo
【パフォーマンス】発光法によるシトクロムP450アッセイ 優れた感度を有するP450測定発光試薬によるスクリーニング
【アプリケーション】
Tecan Freedom EVO 200と各種発光試薬を組み合わせた薬剤開発プロファイリング
1536フォーマットで各種発光/蛍光試薬を用いた化合物プロファイリング 3種類のCYP3A4基質特性 ラット肝細胞P450活性