G8741_CellTox--Green-Cytotoxicity-Assay--10-ml_3 G8742_CellTox--Green-Cytotoxicity-Assay--50-ml_3 G8743_CellTox--Green-Cytotoxicity-Assay_3 G8731_CellTox--Green-Express-Cytotoxicity-Assa_3

Real-Time Cell Death Assay With Multiplexing Compatibility

  • Accurate cytotoxicity determination in exposures out to 72 hours
  • Flexible protocol allows kinetic analysis or endpoint determination
  • Multiplex with luminescent assays to obtain more data per well

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CellTox-Green cell death assay Image

CellTox™ Green 細胞毒性アッセイでリアルタイムでの細胞死モニタリング

培地に漏出されたバイオマーカー検出による細胞毒性試験は、マーカーの安定性に限度があるため 72時間以上の長時間にわたる暴露試験において、その細胞毒性を過小評価してしまう場合があります。CellTox™ Green Cytotoxicity Assay は長時間暴露による培養細胞への毒性効果を簡便、迅速、正確に測定するための試薬です。CellTox Green は細胞毒性のメカニズムを決定するために他のアッセイ法と組合わせたマルチプレックスアッセイを行うことができ、96 から1536 ウェルプレートフォーマットへ容易にスケールを変更可能です。

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CellTox™ Green Dye は、膜の完全性が失われた細胞のDNAに結合します。

毒性の発現時期を特定するためのカイネティックアッセイ

濃度と暴露時間に依存した細胞毒性の増加

ここに示された実験では、ボルテゾミブは4時間から24時間の間にK562細胞に顕著な細胞毒性を引き起こしました。後の時間点での蛍光の増加は、残存する細胞に対する細胞毒性の結果として、膜の完全性の継続的な喪失が生じていることを示しています。CellTox™ Green 色素は播種時に添加されました。

ウェルあたりの情報量を増加させるマルチプレックスアッセイ

細胞毒性と細胞生存性の測定

ここでは、CellTox™ Green DyeをK562細胞と混合し、細胞をプレートに播種した後、化合物を投与しました。72時間の曝露終了時にCellTiter-Glo® Cell Viability Assay試薬を添加し、発光(生存率)を測定しました。これら2つの細胞の健全性に関する逆の指標は、EC50 の一致という結果を示しました。


カスパーゼアッセイの最適なタイミングを決定

CellTox™ Greenはカイネティック測定モードで使用することで、細胞毒性の発現開始のタイミングを特定でき、そのあと同じサンプルウェル内でCaspase-Glo® 3/7 Assayとマルチプレックスアッセイを実施することで、カスパーゼ3/7活性化測定の適切なタイミングを調べることができます。


細胞毒性と細胞増殖抑制効果の判別

この例では、K562細胞を抗増殖化合物であるメトトレキサートに72時間曝露しました。CellTox™ Green dyeを添加して細胞毒性を評価し、その後、同じサンプルウェルにCellTiter-Glo® 試薬を添加して生存率を測定しました。生存率アッセイのみを用いた場合、非処理対照と比較して処理群の細胞数が少ないため、この化合物を細胞毒性があると誤って報告する可能性がありました。細胞毒性アッセイとのマルチプレックスにより、膜の完全性の損傷によるシグナル変化が見られないことから、これは細胞毒性ではなく、増殖抑制であることが明らかになりました。
数か月にわたって堅牢な細胞ベースの細胞毒性アッセイの開発を試みたものの、常に用量反応曲線の上側漸近線において高いばらつきが見られました。Promega の推奨に基づき、従来使用していた細胞毒性検出試薬を CellTox™ Green 細胞毒性試薬に置き換えたところ、この問題は直ちに解決しました。現在、この試薬を用いた細胞ベースアッセイは当社で完全にバリデートされています。

Dr. Fabian Vandermeers, Sr R&D Technical Leader, Quality Assistance S.A.

Specifications

Catalog Number:

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

Lysis Solution

G182B 1 × 0.5ml

Assay Buffer

G610A 1 × 10ml

CellTox™ Green Dye, 1,000X

G873A 1 × 20μl

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

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BB

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

Lysis Solution

G182B 1 × 0.5ml

Assay Buffer

G610B 1 × 50ml

CellTox™ Green Dye, 1,000X

G873A 5 × 20μl

分析証明書

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For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

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BB

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

Lysis Solution

G182B 1 × 0.5ml

Assay Buffer

G610B 2 × 50ml

CellTox™ Green Dye, 1,000X

G873B 1 × 200μl

分析証明書

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For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

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BB

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

CellTox™ Green Dye, 1,000X

G873B 1 × 200μl

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