Viral ToxGlo™ Assay
Viral ToxGlo™ Assayは、溶解性ウイルス粒子に起因する宿主細胞におけるウイルス細胞変性効果(CPE)を定量化できる簡便な方法です。このアッセイは、宿主細胞の生存性の代替測定値として細胞内ATPを測定します。ウイルス感染によりCPEが起きるとATPの枯渇が測定されウイルス負荷に比例します。検出されたATP量は培養中の生きた宿主細胞の数に直接比例し、ウイルス細胞変性効果を定量化するシンプルな方法として利用することができます。ホモジニアスな"添加-混和-測定"だけの操作には、ウイルス処理後の宿主細胞に直接1種類の試薬を添加するステップが含まれいます。“グロータイプ”の発光シグナルは存在するATP量に比例します。CPEの評価に細胞の洗浄、多くのピペッティング操作、視覚的評価は不要です。本システムでは、試薬の添加/混和の10分後に15個/ウェル(384ウェルフォーマット)の細胞を検出することができ、マルチウェルフォーマットで実験をデザインできるため自動化されたハイスループットスクリーニング(HTS)に理想的です。
注意:本製品は細胞毒性あるいはCPEを示すウイルスにのみ有効です。
- 客観的なCPE定量:アッセイ発光検出法による定量データが得られ、視覚的スコアリング法にともなう観察者の主観によるエラーを排除することができます。
- 結果までの時間を短縮:データを記録でき、試薬添加後10分で分析開始。
- CPE評価を簡略化:ホモジニアス“添加-混和-測定”だけのプロトコルは通常のCPE評価法で行われるマニュアルステップを飛躍的に低減。
- フォーマットの柔軟性:96~1536ウェルプレートフォーマットにスケール変更可能。
- ハイスループットスクリーニング対応:発光シグナルは非常に安定(半減期>5時間:細胞種、培地に依存)なためバッチ/連続プロセス可能。蛍光干渉が無いため高いシグナル/バックグラウンド比が得られ、スクリーニングでは非常に優れたZ'値を示します。
- カスタマイズも可能:カスタムオプションの詳細についてはwww.promega.com/custom/ をご覧下さい。
- ウイルスの感染力、50%組織培養感染量(TCID50)の決定
- 潜在的な抗ウイルス力価の決定またはテスト化合物のオフターゲット毒性の決定
This method is only useful for viruses that produce cytotoxicity and CPE.
Using 100μl of ATP Detection Reagent per assay in a 96-well format, Cat.# G8941 is sufficient to perform 100 assays; Cat.# G8942 and G8943, 1,000 assays. Using 25μl of ATP Detection Reagent per assay in a 384-well format, Cat.# G8941 is sufficient to perform 400 assays; Cat.# G8942 and G8943, 4,000 assays.
Features and Benefits
Objectively Quantify CPE: The assay provides quantifiable data by luminescence detection, which obviates subjective operator error associated with visual scoring methods.
Decrease Time to Results: Data can be recorded and analysis begun 10 minutes after reagent addition.
Simplify Assessment of CPE: The homogeneous “add-mix-measure” protocol dramatically reduces the manual steps required for CPE assessment.
Choose Your Format: The reagent is scalable from 96- to 1536-well plate formats.
Amenable to High-Throughput Screening: Luminescent signal is very stable with a half-life generally >5 hours dependent on cell type and medium used, allowing batch or consecutive processing. No fluorescence interference results in high signal to background and delivers excellent Z′ values in screening applications.
Applications include the determination of viral infectivity and the corresponding tissue culture infective dose (TCID50) and potential antiviral potency or off-target toxicity of test compounds.
This method is only useful for viruses that produce cytotoxicity and CPE.
Quantifiable Measure of CPE
Increased luminescence indicates less infective virus and less CPE. Panel A. Dilutions of Influenza virus H1N1 were applied to MDCK monolayers. Panel B. Dilutions of VEEV applied to Vero E6 monolayers. Panel C. Dilutions of dengue virus applied to BHK-21 monolayers. Panel D. Dilutions of RSV applied to A549 monolayers. After incubation, ATP Detection Reagent was added directly to cells and luminescence measured.
Accurately Calculate Toxicity of Test Compounds
Panel A. Test compound reduces viral CPE with no off-target cytotoxicity. MDCK cells with 100 TCID50 of H1N1 (on-target antiviral) or MDCK cells only (off-target cytotoxicity). Panel B. Test compound reduces viral CPE and also causes off-target cytotoxicity. BHK-21 cell monolayer with 100 TCID50 of Dengue virus (on-target antiviral) or BHK-1 cells only (off-target cytotoxicity). After incubation, ATP Detection Reagent was added directly to cells and luminescence measured.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Buffer |
G806A | 1 × 10ml |
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 1 × 1 vial |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Buffer |
G806A | 10 × 10ml |
|
ATP Detection Substrate |
V363A | 10 × 1 vial |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
|
ATP Detection Buffer |
G806B | 1 × 100ml |
|
ATP Detection Substrate |
V363B | 1 × 1 vial |
Resources
その他
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