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No-Wash Immunoassay for HMGB1 Detection

  • Fast add-and-read assay performed directly on cells
  • Detects human or mouse HMGB1
  • Luminescent detection with just a plate-reading luminometer

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迅速かつ洗浄不要なHMGB1検出

High-Mobility Group Box 1 (HMGB1) は、炎症反応で細胞から放出される損傷関連分子パターン (DAMP) として機能します。HMGB1は、免疫原性細胞死(免疫反応を引き起こす特殊な形態の細胞死)の重要なバイオマーカーとして測定され、炎症性サイトカインとしても機能します。ELISA 法など現在の HMGB1 検出法では、面倒な洗浄工程と長いプロトコルが必要です。Lumit™ テクノロジーは、90分以内に完了する "添加・混合・測定" プロトコルでHMGB1の定量を簡略化することができます。

Lumit® HMGB1 イムノアッセイの仕組み

HMGB1に対する一次抗体は、特異的かつ高感度な検出のために選定され、NanoBiT®ルシフェラーゼのLgBiTおよびSmBiTサブユニットで標識されています。HMGB1が存在すると、サブユニットが結合して活性ルシフェラーゼ酵素を形成します。最適化された基質を追加すると、HMGB1レベルに比例した明るい発光シグナルが生じます。このアッセイは、人間とマウスの両方のHMGB1を検出します。
How the lumit HMGB1 assay works.

シンプルなワンプレートプロトコル、洗浄ステップなし!

Lumit® Immunoassay Workflow

Lumit™ 検出法の広いダイナミックレンジ

ヒトとマウスのHMGB1の相同性により、このキットは両方の種に対して使用でき、性能の違いは最小限です。

Lumit™ HMGB1 Mouse Immunoassay standard curve.
Lumit™ HMGB1 Human Immunoassay standard curve.

Target

Human HMGB1

Mouse HMGB1

Limit of Detection 
(3SD above background)

1ng/ml 

3ng/ml 

Dynamic Range

4–1,000ng/ml

3–2,187ng/ml

Assay Time

90 minutes

Sample Type

Cell culture samples

SD=Standard Deviation

ヒト細胞株における二重DAMP測定

Data showing ATP release and HMGB1 release after mitoxantrone treatment

同一条件のアッセイプレートを2枚用意し、一方でU937細胞にミトキサントロンを投与、同一条件のアッセイプレートを2枚用意し、一方でU937細胞にミトキサントロンを投与、RealTime-Glo™ Extracellular ATP Assay を使用して24時間にわたって細胞外ATP放出(左)を動的に測定しました。Lumit® HMGB1イムノアッセイ試薬は、24時間の処理後に処理された細胞の2番目のプレートに直接追加されました。ミトキサントロンは、細胞外ATPの用量および時間依存的な放出(左)と、HMGB1の用量依存的な放出(右)を引き起こし、損傷関連分子パターンの2つの測定間で効力の一致を示します。

ハイスループットNLRP3インフラマソーム阻害剤スクリーニング

Drug-induced immunogenic cell death detected with HMGB1 assay.

NLRP3インフラマソーム阻害剤であるMCC950は、カスパーゼ1の活性化と成熟IL-1βの放出を阻害。分化したTHP-1細胞(5×10 4 /ウェル)にMCC950の段階希釈液を加え、続いてLPS(20 EU / ml)またはビークルを加えました。Lumit™IL-1β(ヒト)イムノアッセイは5時間後に実施。

細胞外ATPのライブセル測定も利用可能

RealTime-Glo™ Extracellular ATP Assayは、死にゆく細胞からのATP放出を動的に測定するため、免疫原性細胞死の誘導をリアルタイムで評価できます。このアッセイをLumit® HMGB1イムノアッセイと組み合わせて使用することで、免疫原性細胞死のより完全な図を得ることができます。

 

Specifications

Catalog Number:

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

HMGB1 (Human) Positive Control

W140A 1 × 20μl

Anti-hHMGB1 mAb-SmBiT, 250X

W141A 1 × 50μl

Anti-hHMGB1 mAb-LgBiT, 250X

W142A 1 × 50μl

Lumit® Detection Substrate B

VB405A 1 × 160μl

Lumit® Detection Buffer B

VB406A 1 × 3.2ml

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

保存条件

BB

パテントおよび免責条項

U.S. Pat. No. 8,809,529, European Pat. No. 2635582, Japanese Pat. No. 5889910 and other patents and patents pending.

U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

HMGB1 (Human) Positive Control

W140A 1 × 20μl

Anti-hHMGB1 mAb-SmBiT, 250X

W141A 5 × 50μl

Anti-hHMGB1 mAb-LgBiT, 250X

W142A 5 × 50μl

Lumit® Detection Substrate B

VB405A 5 × 160μl

Lumit® Detection Buffer B

VB406A 5 × 3.2ml

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

保存条件

BB

パテントおよび免責条項

U.S. Pat. No. 8,809,529, European Pat. No. 2635582, Japanese Pat. No. 5889910 and other patents and patents pending.

U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.

選択製品の構成品内容

Item Part # Size

HMGB1 (Human) Positive Control

W140A 1 × 20μl

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

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