GSH/GSSG-Glo™ Assay
A Luminescent-Based Assay to Detect and Quantify Total Glutathione Ratios
- Measures physiologically relevant GSH/GSSG ratios
- Simple protocol minimizes sample handling, reducing variability
- Stable assay signal amenable to high throughput analysis
Catalog Number:
Size
Catalog Number: V6611
Catalog Number: V6612
Valuable Measurement of Glutathione (GSH-to-GSSG) Ratios
GSH/GSSG-Glo™ Assayは、培養細胞内の総グルタチオン（GSH+GSSG）、GSSG、GSH/GSSG比を検出、定量するための発光アッセイシステムです。GSHレベルの変化は毒性応答の評価に重要であり、アポトーシスや細胞死を引き起こす可能性のある酸化ストレスの指標でもあります。アッセイはシンプル、迅速なマルチウェルプレートフォーマットを提供し、生じる安定した発光シグナルは培養ウェル内サンプルの総GSHあるいはGSSG濃度に相関します。総グルタチオンおよびGSSGの決定は、GSH依存的にLuciferin-NT（GSHプローブ）がグルタチオン-S-トランスフェラーゼによりルシフェリンへ変換される反応とホタルルシフェラーゼ反応のカップリングに基づいています。ルシフェラーゼからの発光は、GSH存在量に依存して生成したルシフェリン量に比例します。これにより発光シグナルはGSH量に比例することになります。総グルタチオンとGSSGの決定は並行して実施することができます。1つは還元剤を用いて細胞ライセートに含まれるすべてのグルタチオン（GSHおよびGSSG）を還元型のGSHに変換して測定する方法です。もう1つは酸化型のGSSGだけを測定する方法です。この方法ではライセートに含まれるインタクトなGSSGをGSHと分けるために全てのGSHをブロックする試薬を加えます。このブロッキングの工程の後にGSSGをGSHに変換して発光反応で定量します。培養ウェル内の細胞で直接定量できるためGSHやGSSGのロスが最小限に抑えられバラツキが低減します。
- 生体に近いGSH/GSSG比：総グルタチオンやGSSGの実質レベルを細胞培養ウェルで直接測定できるので、従来法に比べてGSHやGSSGのロスを抑えサンプルの調製作業や間接的なGSSG算出も必要ありません。
- 頑健なパフォーマンス：生物発光技術およびシンプルなプロトコルにより、サンプルのハンドリングやバラツキが低減。
- シンプルなプロトコル：試薬はマルチウエルプレート内の細胞に直接添加するホモジニアスな”添加-混和-測定”形式で、従来法のような時間のかかる除タンパクや遠心操作が不要。
- 高い感度：感度が高いので従来法よりも少数の細胞でアッセイが可能。
- 迅速：ホモジニアスな”添加-混和-測定”プロトコルにより所要時間が短縮され、発光技術によりインキュベーション時間も最小限。
- 自動化が容易：グロータイプの長時間発光（半減期2時間以上）なので96あるいは384ウェルプレートでの自動化が可能。
- 蛍光による干渉がありません：発光ベースなので、蛍光アッセイにみられる試薬と化合物との蛍光干渉がありません。
- 細胞生存性の指標として細胞内のGSHとGSSGの総レベルを測定
- 細胞の酸化ストレスの指標として細胞内のGSH/GSSG比を測定
- 細胞内のGSHおよびGSSG総レベルに変化を与える薬剤や新化合物のプロファイリング
GSH/GSSG Ratio Determination in Different Cell Lines
| Cell Line | Cells/Well | Ratio GSH/GSSG | |
|---|---|---|---|
| Vehicle | Menadione | ||
| HeLa | 5,000 | 63.8 | 2.2 |
| HepG2 | 10,000 | 92.6 | 2.2 |
| HepaRG® | 50,000 | 35.3 | 2.5 |
| A549 | 5,000 | 87.9 | 10.9 |
| Rat hepatocytes | 50,000 | 19.8 | 1.1 |
The GSH/GSSG-Glo™ Assay. GSH-dependent conversion of a GSH probe, Luciferin-NT, to luciferin by a glutathione S-transferase enzyme is coupled to a firefly luciferase reaction.
Limit of Detection Using Reduced (GSH) and Oxidized (GSSG) Glutathione
GSH (Panel A) and GSSG (Panel B) standards were assayed in a 96-well plate using the GSH/GSSG-Glo™ Assay and a GloMax® Luminometer. The results were averaged and plotted on the graphs above. A linear trend line was generated and correlation coefficients calculated for the fit of the data to the trend line. Limits of detection were 2.5nM GSH and 0.5nM GSSG.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
|
Passive Lysis Buffer, 5X |
E194B | 1 × 1ml | View Product | |
|
DTT |
P117B | 1 × 250μl | 100mM | View Product |
Reconstitution Buffer with Esterase |
V144A | 1 × 10ml | ||
|
Glutathione Reaction Buffer |
V163A | 1 × 10ml | ||
|
NEM, 25mM |
V164A | 1 × 50μl | ||
|
Luciferin-NT |
V687A | 1 × 100μl | ||
|
Glutathione S-Transferase |
V689B | 1 × 500μl | ||
|
Glutathione, 5mM |
V690A | 1 × 100μl | ||
|
Luciferin Detection Reagent |
V859A | 1 × 1 each |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration | Available Separately |
|---|---|---|---|---|
|
Passive Lysis Buffer, 5X |
E194C | 1 × 5ml | View Product | |
|
DTT |
P117C | 1 × 1.25ml | 100mM | View Product |
Reconstitution Buffer with Esterase |
V144B | 1 × 50ml | ||
|
Glutathione Reaction Buffer |
V163B | 1 × 50ml | ||
|
NEM, 25mM |
V164B | 1 × 250μl | ||
|
Luciferin-NT |
V687B | 1 × 500μl | ||
|
Glutathione S-Transferase |
V689B | 3 × 500μl | ||
|
Glutathione, 5mM |
V690A | 2 × 100μl | ||
|
Luciferin Detection Reagent |
V859B | 1 × 1 each |
Resources
No related resources available
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