V1690_PI3K-Lipid-Kinases

Simple, Add-and-Read Assay to Detect Class I PI3K Activity

  • Includes purified recombinant proteins of class I PI3Ks, optimized reaction buffer, ready-to-use lipid kinase substrates and ADP-Glo™ Kinase Assay
  • High signal-to-background ratios even at low percent substrate conversion
  • Easily scalable to 1,536-well format

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Catalog Number: V1690

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拡張可能なホスホイノシチドキナーゼ活性検出アッセイ

ホスファチジルイノシトール(PI)およびそのリン酸化型であるホスホイノシチドは、シグナル伝達分子として重要なセカンドメッセンジャーであり、細胞膜のリモデリングにも関与しています。これらはホスファチジルイノシトール脂質キナーゼ(PIKs)によってリン酸化され、哺乳動物では19種類のPIKアイソフォームが同定されています。PIKsは、イノシトール環の3位、4位、5位の水酸基の選択的なリン酸化能により、PI3K、PI4K、PIP5K/PIP4Kの3つのファミリーに分類されます。

プロメガの脂質キナーゼ酵素、基質および検出システムは、PIK反応およびADP-Glo™ Kinase Assay(発光ADP検出プラットフォーム)を利用したキナーゼ活性測定用の完全な試薬セットを提供します。試薬にはクラスIのPI3K(精製したヒト組み換えタンパク質)、最適化された反応バッファー、すぐに使用可能な脂質キナーゼ基質が含まれます。

 

  • クラスI PI3Kのための完全なソリューション
    -高い比活性を有する精製ヒト組み換え酵素
    -Ready-to-useな脂質基質(PI or PIP2)
    -ユニバーサルな反応バッファー組成
    -高感度なアッセイシステム
  • 優れた選択性:基質の変換率(%)が低くでも高いシグナル/バックグラウンド比。    
  • 信頼の結果:広いダイナミックレンジ、低バックグラウンド、優れた感度により明瞭なデータが得られます。
  • 時間の節約:シンプルな“添加&測定”フォーマットによるホモジニアスアッセイ。
  • 偽陽性を低減:特殊な組成および発光シグナルにより偽陽性率が低減。
  • コストセーブ:1,536-ウェルフォーマットに変更できウェルあたりのコストを低減。
  •  
  1. Cantley, L.C. (2002) The phosphoinositide 3-kinase pathway. Science 296, 1655–7.
  2. Markman, B. et al. (2010) Status of PI3K inhibition and biomarker development in cancer therapeutics. Annals Oncology 21, 683–91.
  3. Brown, J.R. and Auger, K.R. (2011) Phylogenomics of phosphoinositide lipid kinases: perspectives on the evolution of second messenger signaling and drug discovery. BMC Evolutionary Biology 11, 1–34.
  4. Hawkins, P.T. et al. (2006) Signalling through Class I PI3Ks in mammalian cells. Biochem. Soc. Trans. 14, 647–62.

PI3K-Glo™ Class I Profiling Kit の特長

PI3K-Glo™ Class I Profiling Kitには、PI3K(α、β、γ、δ; 各5μg)、PIP2:3PS脂質キナーゼ基質(0.25mg)、およびADP-Glo™キナーゼアッセイ(1,000回分)が含まれています。脂質基質は、ホスファチジルイノシトール(PI)またはホスホイノシトール-4,5-ビスホスフェイト(PIP2)をキャリア脂質としてのホスファチジルセリン(PS)と1:3の比率で混合した凍結単層小胞として供給されます。PIP2:3PS基質はクラスI PI3Kでの使用に最適化されており、PI:3PS基質はユニバーサルなPI脂質キナーゼ基質を提供します。

この使いやすい発光アッセイは、基質の低い%変換でも高いシグナル対バックグラウンド比で感度の高い検出を提供します。アッセイは1,536ウェルフォーマットに容易にスケーラブルであり、ウェルあたりのコストを削減し、スクリーニングアプリケーションに適しています。

脂質キナーゼアッセイの原理

脂質キナーゼアッセイの原理を以下の図に示します。脂質キナーゼ反応は、脂質基質(PI:3PSまたはPIP2:3PS)とリコンビナント酵素およびATPをインキュベーションすることにより実施され、キナーゼ活性はADP-Glo™ Kinase Assayを用いて測定されます。ADP-Glo™ Kinase Assayは2ステップで完了します。キナーゼ反応後に脂質キナーゼ反応を停止させ、残存するATPを枯渇させADPのみにするためにATP-depletion reagentを添加します。次にADPからATPへの変換と、新しく生成したATPを光に変換するためのルシフェラーゼ/ルシフェリン反応を同時に行うdetection reagentを添加します。

10262MA

脂質キナーゼアッセイ関連製品

The PI3K-Glo™ Class I Profiling Kit には、精製キナーゼ、基質、ADP-Glo™ Kinase Assay試薬が含まれています。

ADP-Glo™ Kinase Assay、基質および各精製キナーゼは個別にも提供しています。

PI3K-Glo™ Class I Profiling Kitに含まれるPI3K組替え酵素

Sources

PI3K (p110α/p85α), 20μg: Complex of recombinant N-terminal FLAG-tagged full-length human p110α (GenBank® Accession Number U79143) and human p85α (no tag; GenBank® Accession Number XM_043865). Co-expressed in Sf9 insect cells.

PI3K (p110α[E545K]/p85α), 20μg:
Complex of recombinant N-terminal FLAG-tagged full-length human p110α (GenBank® Accession Number U79143) and human p85α (no tag; GenBank® Accession Number XM_043865). Co-expressed in Sf9 insect cells.

PI3K (p110α[H1047R]/p85α), 20μg:
Complex of recombinant N-terminal FLAG-tagged full-length human p110α (GenBank® Accession Number U79143) and human p85α (no tag; GenBank® Accession Number XM_043865). Co-expressed in Sf9 insect cells.

PI3K (p110β/p85α), 20μg: Complex of recombinant N-terminal FLAG-tagged full-length human p110β (GenBank® Accession Number NM_006219) and human p85α (no tag; GenBank® Accession Number XM_043865). Co-expressed in Sf9 insect cells.

PI3K (p120γ), 20μg:
Recombinant N-terminal His-tagged full-length human p120γ (GenBank® Accession Number NM _02649) expressed in Sf9 insect cells.

PI3K (p110δ/p85α), 20μg:
Complex of recombinant N-terminal GST-tagged full-length human p110δ (GenBank® Accession Number NM_005026) and human p85α (no tag; GenBank® Accession Number XM_043865). Co-expressed in Sf9 insect cells.
Lipid Kinase Assay 個別販売製品情報
Lipid Kinase Assay Reagent Cat. #
PI:3PS or PIP2:3PS Substrates
Recombinant Human PI3K Enzymes

Specifications

Catalog Number:

選択製品の構成品内容

Item Part # Size Available Separately

ADP-Glo™ Reagent

V912A 1 × 5ml

Kinase Detection Buffer

V913A 1 × 10ml

Kinase Detection Substrate

V914A 1 × 1 each

Ultra Pure ATP, 10mM

V915A 1 × 500μl

ADP, 10mM

V916A 1 × 500μl
PI3K Reaction Buffer, 5X V169A 2 × 1ml

PI3K (p110α/p85α), 5µg

V172A 1 × 50μl View Product
PI3K (p110β/p85α), 5µg V175A 1 × 50μl View Product
PI3K (p120γ), 5µg V176A 1 × 50μl View Product
PI3K (p110δ/p85α), 5µg V177A 1 × 50μl View Product
PIP2:3PS Substrate, 1mg/ml PIP2 V170A 1 × 0.25ml View Product
Lipid Dilution Buffer, 10X V180A 1 × 1ml

MgCl2, 1M

V330A 1 × 1ml

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

保存条件

AA

See Technical Manual for detailed storage recommendations.

パテントおよび免責条項

U.S. Pat. No. 7,700,310 and other patents and patents pending.

U.S. Pat. No. 8,183,007 and other patents and patents pending.

Resources

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