Sensitive, Luminescent AMP Detection
AMP-Glo™ Assayは、反応産物としてAMPを生成するあらゆる生化学反応より発光シグナルを生じるホモジニアスアッセイです。この多用途に対応するシステムは、環状AMP特異性ホスホジエステラーゼ、アミノアシルtRNA合成酵素、DNAリガーゼ、ユビキチンリガーゼあるいはAMPにより変調する酵素など幅広い酵素の活性測定に使用することができます。AMP-Glo™ Assayはハイスループットフォーマットを含む様々なプレートフォーマットで生化学反応においてAMP濃度を定量的にモニタリングするためにデザインされています。アッセイの安定な発光シグナルにより、インジェクターを備えたルミノメーターの必要性をなくし、マルチプレートのバッチモード処理を可能にします。本アッセイではATPの有無に関係なく生成したAMPを測定することができます。
このアッセイには2つの試薬が含まれ、1つはAMPを生成する酵素反応の停止すると同時にATPを除去し、生成したAMPをADPに変換する試薬、もう2番目の試薬はADPをATPに変換し、次にルシフェリン/ルシフェラーゼ反応を用いてATPを発光シグナルに変えます。また、本アッセイはcAMP依存性ホスホジエステラーゼ(PDE)や細菌のDNAリガーゼなどATPを使用しない酵素により触媒される生化学反応におけるAMPのモニタリングにも最適です。
AMP-Glo™ Assayは広いダイナミックレンジを持ち、低い基質変換率でも強いシグナルを生じるため活性の低い酵素のスクリーニングにも適しています。本アッセイは偽陽性も最低レベルに抑えられ、Z'値は0.7以上です。
※ 表示のサイズは低ボリューム384プレートでのアッセイ数(96ウェルプレートの場合は1/5のアッセイ数)
AMP生成酵素に作用するライブラリー化合物をスクリーニング
AMP-Glo™ アッセイは、高いダイナミックレンジを持ち、低い基質変換効率でも強いシグナルを生成するため、低活性酵素のスクリーニングが可能です。このアッセイは、偽ヒットが少なく、Z´値が0.7以上であるため、以下のような標的酵素に作用するライブラリ化合物のスクリーニングに使用することができます:
- ユビキチンリガーゼ
- サイクリックAMP特異的ホスホジエステラーゼ
- アミノアシルtRNAシンテターゼ
- DNAリガーゼ
- ポリ(A)デッドニラーゼ
- 脱メチル化酵素(間接法)
AMP-Glo™アッセイは、5μlの反応酵素、5μlのAMP-Glo™ 試薬、10μlのAMP検出溶液を用いて、低容量の384ウェルプレートフォーマットで表示通りの反応数を行うのに十分な試薬が含まれています。また、標準的な96ウェルプレート(25μl:25μl:50μl)でも使用することができます。
データをもっと見る: この査読付き論文は、AMP-Glo™アッセイを使用して、可溶性および膜結合性のエクトヌクレオチダーゼ CD73およびCD39のモニタリングと特性評価を行っています。
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
| AMP-Glo™ Reagent I | V503A | 1 × 5ml |
| AMP-Glo™ Reagent II | V504A | 1 × 100μl |
| Kinase-Glo® One Solution | V505A | 1 × 10ml |
| AMP, 10mM | V506A | 1 × 100μl |
|
Ultra Pure ATP, 10mM |
V915A | 1 × 500μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
| AMP-Glo™ Reagent I | V503B | 1 × 50ml |
| AMP-Glo™ Reagent II | V504B | 1 × 1ml |
| Kinase-Glo® One Solution | V505B | 1 × 100ml |
| AMP, 10mM | V506B | 1 × 1ml |
|
Ultra Pure ATP, 10mM |
V915B | 1 × 5ml |
Resources
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