Y Chromosome Deletion Detection System, Version 2.0

Y Chromosome Deletion Detection System, Version 2.0は、唯一の情報源であるY染色体上の非多型性シークエンスタグサイト（STS）を増幅して、標準化されたスクリーニングパネルを供給します。本システムはAZoospermia Factor（AZF）に関連する機能性領域すなわちDAZ, KAL-Y, SMCYを含むAZFaの側面、AZFb, AZFc, AZFd内部に位置するローカスおよび精子形成関連遺伝子（RBM1, DFFRY, DBY）の側面に位置するローカスを増幅します。この改良型のバージョン2.0システムにはEuropean Quality Monitoring Network （EQMN）の推奨に従った新たなSTSが加わりました。計20種類のY染色体に特異的なプライマーペアからなる5種類のマルチプレックスマスターミックスが含まれ、その中の4つのマルチプレックスプライマーセットにはX染色体特異的内部標準用プライマーペア（SMCXローカス）が含まれています。残りの1つのマルチプレックスプライマーセット（Multiplex E Master Mix）には男性/女性DNA（ZFX/ZFY）に含まれるユニークな領域を増幅するコントロールプライマーペアが含まれます。また、ＹからＸへの転座により起こるＸＸ男性を検出するY染色体の短腕上の精巣決定因子のためのコントロールとして、SRY遺伝子の1つの領域に対するプライマーペアが含まれています。
マルチプレックスマスターミックスは、Ｙ染色体のいくつかの異なる領域を同時に増幅するためにデザインされています。5つのマルチプレックスPCRの増幅産物（83～496bp）はアガロースゲル電気泳動により明瞭に分離され、エチジウムブロマイド染色により観察することができます。
Ｙ染色体上の特異領域が増幅できない場合、そのテストサンプルにＹ染色体の欠失があることを示しています。本システムに含まれるプライマーセットを用いた増幅により検出されたY染色体の欠失は、男性不妊症に関連しています。サイズコントロールラダーは欠失分析の時間を最低限に抑え、増幅産物の分子量判定を正確に行うことができます。

• 簡便性: 内部標準を含む5つのマスターミックスには計20種類のプライマーセットが含まれ、使用前の最適化も不要
• 頑健な反応: 組成の改良、GoTaq® DNA Polymeraseの使用によりエラーを低減
• 柔軟性: 様々な方法で精製したゲノムDNAから増幅でき、PE480（oiloverlay）およびPE9600/9700（non-oiloverlay）サーマルサイクラーにも対応。
• 完全性: 必要な試薬をすべて供給（PE9600またはPE9700サーマルサイクラーで必要になるAmpliTaqGold®を除く）

• Y染色体の欠失解析

1. Skaletsky, H. et al. (2003) Nature 423, 825–37. * Especially note Figure 2, available online as data supplementary to the article.
2. Vollrath, D. et al. (1992) Science 258, 52–9.
3. Foote, S. et al. (1992) Science 258, 60–6.
4. Kent-First, M.G. et al. (1996) Nat. Genet. 14, 128–9.