pF1 T7 Flexi® Vectors

以下のベクターは大腸菌または無細胞系でＴ7RNAポリメラーゼプロモーターによるHaloTag®融合タンパク質の誘導発現に使用されます。発現レベルは個々のタンパク質によって異なりますが、一般的にＮ末端HaloTag®融合タンパク質（例：pFN18A/K[Cat.#G2751,G2681]）の方が発現レベルが高く、リフォールディング、可溶性に優れる傾向があります。HaloTag®ベクターには1）マルチクローニングサイト(MCS)を含むベクター（従来のクローニング用）、2）Flexi®システムベクターの2つのフォーマットがあります。

Flexi®Vector Systemは、タンパク質コード配列を簡便、パワフルに方向性を維持してクローニング（ダイレクショナルクローニング）する方法を提供します。このクローニング法は２種類のレアカッター制限酵素SgfIおよびPmeI がベースとなっており、様々なFlexi®ベクター間でタンパク質コード領域を移し換える迅速、効率的、フィデリティーの高い方法で、シークエンシングをする必要もありません。直接的な移換えは2つのN末端タグベクター間またはN末端からC末端ベクターへの移動する場合にのみ行われます。MCSベクターおよびいくつかのFlexi®systemベクターはHis6-HaloTag®デュアルタグを有しており、発現したデュアルタグタンパク質はHaloTag®の共有結合による標識機能を残しながら、再使用可能なNi-レジンで精製することができます。
 
マルチクローニング(MCS)ベクター
pH6HTN His6HaloTag®T7Vector(Cat.#G7971)：Ｎ末端His6-HaloTag®デュアルタグの付加したタンパク質の大腸菌およびT7無細胞系での発現用
pH6HTC His6HaloTag®T7Vector(Cat.#G8031)：C末端His6-HaloTag®デュアルタグの付加したタンパク質の大腸菌およびT7無細胞系での発現用

Flexi®システムベクター
pF1A/K T7Flexi®Vectors(Cat.#C8441,C8451)：タグの無いタンパク質の発現用
pFN18A/K HaloTag®T7Flexi®Vectors(Cat.#G2751,G2681)：Ｎ末端HaloTag®を付加したタンパク質の大腸菌およびT7無細胞系での発現用
pFN19A/K HaloTag®T7SP6Flexi®Vectors(Cat.#G1891,G1841)：Ｎ末端HaloTag®を付加したタンパク質のT7およびSP6無細胞系での発現用（無細胞発現系に最適化）
pFC20A/K HaloTag®T7SP6Flexi®Vectors(Cat.#G1681,G1691)：C末端HaloTag®を付加したタンパク質の大腸菌およびSP6無細胞系での発現用（無細胞発現系に最適化）
pFN29A/K His6HaloTag®T7Flexi®Vectors(Cat.#G8261,G8331)：Ｎ末端His6-HaloTag®デュアルタグを付加したタンパク質の大腸菌およびT7無細胞系での発現用
pFC30A/K His6HaloTag®T7Flexi®Vectors(Cat.#G8321,G8381)：C末端His6-HaloTag®デュアルタグを付加したタンパク質の大腸菌およびT7無細胞系での発現用

注： Flexi®ベクターには致死性のバーナーゼ遺伝子が含まれているため、サブクローニングを行う上でインサートを含まないバックグラウンドコロニーを低減することができます。Flexi®Vector Cloning System ではバーナーゼを目的のインサートで置き換えます。インサートとの交換前のバーナーゼを含むベクターは、標準的な実験室の大腸菌株では増やせません。

20,000以上のヒトORFを揃えるHaloTag®ORFクローンについてはこちらをご覧ください。

• 2つのクローニング法:HaloTag®テクノロジーの利用に従来のマルチクローニングサイト(MCS)またはFlexi®クローニングから選択可能
• デュアルタグ:HaloTag®テクノロジーのタンパク質の標識および可溶化の利点と再使用できスループットも上がるNi親和性テクノロジーの利点を両方利用可能
• 多用途なクローニング:様々な発現系および融合タグ（N/C末端）の豊富な選択肢と簡便な移換え（Flexi®システム）
• 時間の節約:効率の高い移換え法により、バックグラウンドコロニーを排除する手間もなく、そのまま組換えクローンを使用可能

• HaloTag®テクノロジーを付加した細菌でのタンパク質発現および精製
• HaloTag®テクノロジーを付加した無細胞系でのタンパク質発現および精製
• HaloTag®リガンドによるHaloTag®融合タンパク質の標識（共有結合）とHis6による精製

さらに知りたい方は、プロトコール&ガイド（英語）をご覧ください。

【ライセンス】HaloTagシリーズ   【Q&A】HaloTag.

【簡易マニュアル】日本語

※日本語マニュアルは英語版を翻訳したものですが、常に更新されるものではありません。最新のマニュアルについては英語版（”Product Resources”タブ→“Protocols”）をご覧ください。

【HaloTagスターターガイド】日本語   【pHT2ベクターを利用する際の注意点】日本語   【ベクターマップ＆シークエンス】日本語

【パフォーマンス】HaloTag® の優位性   細胞イメージング、タンパク質の捕捉と固定化のためのHaloTag™ Interchangeable Labeling Technology

製品概説   HaloTag®付加によるタンパク質の可溶性向上

【アプリケーション】1ウェル観察からハイコンテントスクリーニングまで   パルスチェイス実験のための時間差標識    

HaloLink™ Resinを用いたHaloTag™ タンパク質の捕捉・精製   膜非透過性リガンドによる細胞表面タンパク質の標識と細胞内外移行の観察 

ヒト神経幹細胞および分化細胞でのHaloTagタンパク質発現と標識による動態イメージング

タンパク質複合体解析～HaloTag®を用いたプルダウンアッセイ、プロテアソームの事例～

【ガイド】HaloTagガイド

Flexi® Vector System について

Flexi® Vector System はタンパク質コード配列のディレクショナルクローニング (directional cloning) を行うシンプルで強力なシステムです。2種類のレアカッター制限酵素 SgfI および PmeI による消化をベースにしており、様々な Flexi® Vector 間でのタンパク質コード領域を迅速、効率的、高い忠実性で移換えられるので、シークエンスの確認も不要です。組換えクローンをそのまま使用できるため、バックグラウンドコロニーよりスクリーニングする時間を節約することができます。 また、Flexi® system の汎用性により様々な発現系や融合タグより選ぶことができます。ダイレクトな組換えは２つのN末端タグベクター間またはN末端ベクターからC末端ベクターで行うことができます。

備考：サブクローニングを行う上で、遺伝子が挿入されていないバックグラウンドコロニーを低減するためにFlexi® Vector にはバーナーゼ致死遺伝子が含まれています。Flexi® Vector Cloning System ではバーナーゼ遺伝子と目的遺伝子が置き換わります。購入した空の Flexi® ベクターは標準的な実験で用いられる大腸菌株では増やすことはできません。

Sequence Information

pF1A T7 Flexi® Vector GenBank® Accession Number AY753576 and vector sequence text file.

pF1K T7 Flexi® Vector GenBank® Accession Number AY753577 and vector sequence text file.