DNA Polymerase I Large (Klenow) Fragment

DNA Polymerase I Large (Klenow) Fragment はインタクトな E.coli DNA Polymerase I から5'→3'エキソヌクレアーゼ活性が欠如したDNAポリメラーゼです。5'→3'ポリメラーゼ活性、3'→5'エキソヌクレアーゼおよびストランド置換活性は保持しています。本酵素はDNA Polymerase I のC-末端断片で分子量は約68kDaです。Klenow Fragmentの5'→3'ポリメラーゼ活性は、5'突出末端の標識/未標識dNTPによる"fill in"や一本鎖または二本鎖DNAのシークエンシング、合成オリゴヌクレオチドを用いたin vitro 変異導入、セカンドストランドcDNA合成、一本鎖DNAプローブの合成などに使用されます。また、3'→5'エキソヌクレアーゼ活性は、3'-突出末端の平滑化に利用されます。

• 10X Reaction Buffer添付：500mM Tris-HCl (pH7.2 at 25°C), 100mM MgSO₄, 1mM DTT.
• 様々な分子生物学実験に使用され、多くのプロメガ1X制限酵素バッファー中で活性を持ちます。
• 75°C、10分間で不活性化されます。
• 二本鎖DNA末端の平滑化あるいは3′-末端標識
• セカンドストランドcDNAの合成
• ジデオキシ法によるDNAシークエンシング

1. Anderson, S. et al. (1980) Nucl. Acids Res. 8, 1731–43.
2. Sanger, F. et al. (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 5463–7.
3. Wallace, R.B. et al. (1980) Science 209, 1396–400.
4. Houdebine, L.M. (1976) Nucl. Acids Res. 3, 615–30.
5. Feinberg, A.P. and Vogelstein, B. (1983) Anal. Biochem. 132, 6–13.
6. Tabor, S. and Struhl, K. (1987) In: Current Protocols in Molecular Biology, Ausubel, F.M. et al., eds., John Wiley and Sons, New York, NY.
7. Joyce, C.M. and Grindley, N.D.F. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80, 1830–4.

Storage Buffer: 50mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM DTT, 0.1mM EDTA and 50% (v/v) glycerol.

Source: Recombinant E. coli strain.

QC Tests: Activity, SDS-PAGE/purity, endonuclease.

Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme that incorporates 10nmol of total deoxyribonucleotides into TCA-insoluble material in 30 minutes at 37°C. The reaction conditions are: 67mM potassium phosphate (pH 7.5 at 25°C), 6.7mM MgCl₂, 1mM DTT, 50μg/ml activated calf thymus DNA and 33μM each of dATP, dCTP, dGTP and dTTP (a mix of unlabeled and [³H]dTTP).