T4 RNA Ligase

T4 RNA Ligaseは、ATPに依存して、1本鎖RNAまたはDNAの分子間および分子内の連結を行い、1本鎖RNAまたはDNAの5'-末端のリン酸基と3'-末端の水酸基を結合します。同様に、1本鎖RNAに[5'-³²P]nucleoside3',5'-bis(phosphate)を付加する反応も行います。本酵素はRNase Iを欠如する組換えE.coli CA4株から精製しており、分子量は約43.5KDaです。

• 10X Reaction Buffer添付： 500mM Tris-HCl(pH7.8 at25℃),100mM MgCl₂,50mM DTT,10mM ATP
• 熱失活： 65℃,15分で不活性化します

• 1本鎖RNAまたはDNAの連結
• RNAの3′-末端標識
• RNAおよびDNAオリゴヌクレオチドの環状化
• 完全長のcDNAのクローニング

1. Silber, R. et al. (1972) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69, 3009–13.
2. England, T. et al. (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74, 4839–42.
3. Uhlenbeck, O.C. and Gumport, R.I. (1982) The Enzymes 158, 31.
4. Brennan, C.A. et al. (1983) Meth. Enzymol. 100, 38–52.
5. Schaefer, B.C. (1995) Anal. Biochem. 227, 255–73.

Storage Buffer: 10mM Tris (pH 7.5 at 25°C), 50mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% glycerol, 0.1% Tween® 20.

Source: Recombinant E. coli strain.

QC Tests: Activity, SDS-PAGE/purity, DNase, RNase, endonuclease.

Unit Definition: One unit catalyzes the formation of 1nmol of [5´-³²P]rA_14–20 into a phosphatase-resistant form in 30 minutes at 37°C in a total volume of 30μl. The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 7.8 at 25°C), 10mM MgCl₂, 5mM DTT, 1mM ATP and 10μM [5´-³²P]rA_14–20.