Triglyceride-Glo™ Assay
Detect Triglyceride from a Variety of Biological Samples
- Works with lysed cells, tissues, medium and serum samples
- No organic extraction, extreme heat or centrifugation required
- Linear triglyceride detection up to 80µM
Catalog Number:
Size
Catalog Number: J3160
Catalog Number: J3161
迅速かつ高感度な生体サンプル中のトリグリセリド検出
Triglyceride-Glo™アッセイは、細胞溶解液や細胞培養培地、血清、組織ホモジネート、その他の生体サンプル中のトリグリセリドを迅速かつ高感度に測定するための生物発光アッセイです。このアッセイは、正常および病態でのトリグリセリドの蓄積とクリアランスの測定に最適です。例えば、非アルコール性脂肪肝疾患（NAFLD）および非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）の初期の特徴を示す脂肪症の原因となる過剰なトリグリセリドを蓄積する脂肪細胞、肝臓サンプルまたは細胞培養肝臓モデルなどが含まれます。
アッセイの概要
Triglyceride-Glo™ Assay は、リパーゼによる酵素反応で放出されるグリセロールを測定することにより、トリグリセリドレベルを検出しますで （トリグリセリド1モルあたりグリセロール1モル) 。グリセロールは、NADHの生成とルシフェラーゼ発光を生じるプロルシフェリンの活性化をリンクする反応スキームにより測定されます。トリグリセリドの量は、リパーゼの非存在下（遊離グリセロール）と存在下（総グリセロール）で測定されたグリセロールの差から決定されます。リパーゼは、トリグリセリド（TAG）をグリセロールに変換します。グリセロールキナーゼとグリセロール-3-リン酸デヒドロゲナーゼはNADHを生成するために使用されます。NADHの存在下で、レダクターゼはプロルシフェリンレダクターゼ基質を酵素的にルシフェリンに還元します。ルシフェリンは、Ultra-Glo™ルシフェラーゼとATPを使用したルシフェラーゼ反応で検出され、生成された発光量はサンプル中のグリセロールの量に比例します。
シンプルなプロトコルは様々なサンプルタイプに適応
有機抽出は不要
3T3L1-MBX 線維芽細胞から分化した脂肪細胞を、有機抽出法の有無と Triglyceride-Glo™ アッセイの組み合わせで測定しました。1セットのウェル分をメタノールで抽出し、ガラスバイアルに移して一晩蒸発させて乾固させました。
他のウェルセットでは有機抽出は行わず、両方のサンプルセットを Lysis Solution で抽出し、トリグリセリドレベルを測定しました。有機抽出を行わずに回収したトリグリセリド量が6回の繰り返し実験でいずれも多く、変動も少なかった。
ヒト肝臓 微小組織における トリグリセリドレベル
肝細胞のトリグリセリドレベルの定量化は、非アルコール性脂肪性肝疾患（NAFLD）や非アルコール性脂肪性肝炎（NASH）など肝疾患研究に使用されます。ここでは、ヒト肝臓 微小組織を肝細胞の脂肪変性モデルとして使用し、トリグリセリドレベルを定量化します。
3D InSight™ヒト肝臓 微小組織（MT、InSphero、〜1150個 細胞/ウェル）を生理学的（LG / LI）または超生理学的（LG / HI）レベルのグルコースおよびインスリンを含む無血清培地で3〜10日間インキュベートし、 BSAに結合した遊離脂肪酸（FFA）または低密度リポタンパク質血漿画分（LDL）のいずれかを補充しました。細胞内グリセロール含量は総グリセロール含量に有意に寄与しないため、微小組織をPBSで2回洗浄し、標準プロトコルに従って総グリセロール含量を測定しました。値は、MTあたりのトリグリセリドの濃度としてプロットされました。データは、スイスのチューリッヒにあるInSphero、AGから提供されました。
分化脂肪細胞のトリグリセリドレベルの定量
分化脂肪細胞における脂質の蓄積は、オイルレッドO染色およびトリグリセリド-Glo™アッセイでモニターしました。3T3L1-MBX線維芽細胞の平行プレートは、標準プロトコルに従って分化しました。
5、12、14、および21日目（それぞれパネルA〜D）に、平行プレートをオイルレッドOで染色するか、Triglyceride-Glo™ Assay で総グリセロール含有量をアッセイしました。Triglyceride-Glo™ Assay は、分化脂肪細胞のトリグリセリドレベルを定量的に測定することができます。
シンプルなサンプル調製プロトコルには、界面活性剤による溶解ステップと、トリグリセリド定量前のサンプル希釈のみが含まれます。有機抽出や高温での加熱ステップは必要ありません。
Protocols
Complete Protocol
Quick Protocols
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase Substrate |
G885A | 1 × 55μl | |
Glycerol Lysis Solution |
J315A | 1 × 10ml | |
Kinetic Enhancer |
J316A | 1 × 50μl | |
Glycerol Detection Solution |
J317A | 1 × 5ml | |
Lipoprotein Lipase |
J318A | 1 × 400μl | |
Glycerol Standard |
J324A | 1 × 500μl | 20mM |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase Substrate |
G885B | 2 × 275μl | |
Glycerol Lysis Solution |
J315B | 1 × 100ml | |
Kinetic Enhancer |
J316B | 1 × 500μl | |
Glycerol Detection Solution |
J317B | 1 × 50ml | |
Lipoprotein Lipase |
J318B | 1 × 4ml | |
Glycerol Standard |
J324A | 1 × 500μl | 20mM |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
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