Glutamate-Glo™ Assay
Detect Glutamate from a Variety of Biological Samples
- Amenable to high-throughput formats
- Detect even intracellular levels of glutamate
- Limit of detection in the nM range
Catalog Number:
Size
Catalog Number: J7021
Catalog Number: J7022
生物学的サンプルよりグルタミン酸を発光検出
グルタミン酸は、核酸、ヌクレオチドおよびタンパク質を合成するための前駆体になる重要な代謝物です。また、グルタミン酸は神経細胞における主要な神経伝達物質でもあります。アップレギュレートされたグルタミン酸合成は、高い増殖速度維持のためのグルタミノリシスにより増加したがん細胞のマーカーとして使用されます。Glutamate-Glo™ Assay は様々なサンプル種よりグルタミン酸レベルの変化を測定するために適しており、細胞内レベルのグルタミン酸でも検出できる十分な感度を備えています。
測定原理
グルタミン酸脱水素酵素がグルタミン酸とNAD+を用いて α-ケトグルタミン酸と NADHを産生します。の NADH 存在下でルシフェリン前駆体基質はレダクターゼによりルシフェリンに変換され Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase の基質となり発光します。
グルタミン酸脱水素酵素 (GlutDH)、NAD+、レダクターゼ、レダクターゼ基質およびルシフェラーゼを含む Glutamate Detection Reagent をグルタミン酸を含むサンプルに等量加えると酵素カップリング反応が同時に起こります。発光シグナルはサンプルに含まれるグルタミン酸に比例し、すべてのグルタミン酸が消費されるまで増加し、その後発光シグナルは安定します。
グルタミン酸測定の感度と測定レンジ
処理数やプロセスに柔軟に対応
The Glutamate-Glo™ Assay は柔軟性の高いシステムで、ハイスループットフォーマットも可能で、多くのサンプル種にも対応します（リニアレンジにフィットさせるために希釈などの前処理が必要な場合もあります）。また、内在性の酵素活性の不活化、除タンパク質および NAD(P)H 分解（ technical manual で推奨 ）などが必要な場合もありますが、これらの処理を簡便に行う96- および 384 ウェルプレートに対応した方法を提供しており、サンプルの遠心やスピンカラムも使用しません。
細胞によるグルタミン酸の分泌
利点
様々なサンプル種より迅速に代謝物を測定: 培地、細胞、組織および血漿より測定可能。最小限のサンプル調製ステップだけで、遠心やスピンカラムは不要。
細胞内測定の場合、ウェル内での簡便な前処理だけで完了
広いダイナミックレンジ: 3桁までの直線性を有しているのでサンプル測定が容易
わずかな変化でも検出: S/Bmax > 100 のアッセイウインドウを持つので発色法や蛍光法によるアッセイよりもわずかな代謝物レベルの変化を検出
サンプルあたりの情報量を最大限に: 同じサンプルより複数の代謝物を測定でき、細胞生存性試験とのマルチアッセイで補正することも可能
1つのサンプルより複数の代謝産物を測定 !
細胞内のエネルギー状態で重要な4種類の代謝産物 — グルコース、乳酸、グルタミン酸およびグルタミンを発光アッセイ Glucose-Glo™、Lactate-Glo™、 Glutamine/Glutamate-Glo™ および Glutamate-Glo™ Assay で同時並行で測定することができます。 これら4種の発光アッセイすべてにサンプル処理が対応するため4種すべての代謝物を同一サンプルより検出することができます。これらのサンプル種には培地、血漿、血清および組織などが含まれます。以下のデータは Technical Manual TM494 に従い、同じ培養細胞より取得した培地サンプルを用いて代謝産物を測定したものです。
参考文献
- Zhou, W. et al. (2014) Self-immolative bioluminogenic quinone luciferins for NAD(P)H assays and reducing capacity-based cell viability assays. Chem BioChem 15, 670–5.
- Vidugiriene, J. et al. (2014) Bioluminescent cell-based NAD(P)/NAD(P)H assays for rapid dinucleotide measurement and inhibitor screening. Assay and Drug Development Technologies 12, 514–26.
- Leippe, D. et al. (2017) Bioluminescent assays for glucose and glutamine metabolism: High-throughput screening for changes in extracellular and intracellular metabolites. SLAS Discovery 22(4), 366–77.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase |
G884A | 1 × 55μl | 6mg/ml |
Reductase Substrate |
G885A | 1 × 55μl | |
Luciferin Detection Solution |
J135A | 1 × 5ml | |
NAD |
J136B | 1 × 275μl | |
Glutamate |
J139A | 1 × 50μl | |
Glutamate Dehydrogenase |
J141A | 1 × 100μl |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase |
G884B | 1 × 275μl | 6mg/ml |
Reductase Substrate |
G885B | 1 × 275μl | |
Luciferin Detection Solution |
J135B | 1 × 50ml | |
NAD |
J136C | 1 × 1ml | |
Glutamate |
J139A | 1 × 50μl | |
Glutamate Dehydrogenase |
J141B | 1 × 1ml |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
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