Glutamine/Glutamate-Glo™ Assay
Sensitive, Quick Detection of Glutamine and Glutamate in Biological Samples
- Detect even small changes in metabolites
- Multiplex with other metabolite or viability assays
- Perform on a variety of sample types
Catalog Number:
Size
Catalog Number: J8021
Catalog Number: J8022
生物学的サンプルよりグルタミンおよびグルタミン酸を迅速検出
Glutamine/Glutamate-Glo™ Assay は様々なサンプル種よりグルタミンおよびグルタミン酸を迅速、高感度に測定する発光アッセイです。発光シグナルなら発色アッセイや蛍光アッセイのようにシグナルへの干渉を受けることがありません。また、サンプルからグルタミンとグルタミン酸の両方を測定できるため、ほかのアッセイは不要です。
測定原理
Glutamine/Glutamate-Glo™ Assay はグルタミナーゼ酵素によるグルタミンからグルタミン酸への変換がベースになっています。次にグルタミン酸の酸化とそれにより生成される NADH を発光 NADH 検出システムで測定します。グルタミン酸脱水素酵素がグルタミン酸とNAD+を用いて α-ケトグルタミン酸とNADHを産生します。この NADH 存在下でルシフェリン前駆体基質はレダクターゼによりルシフェリンに変換され Ultra-Glo™ Recombinant Luciferase の基質となり発光します。
このアッセイは2つのステップ： i) グルタミナーゼによるグルタミンからグルタミン酸への変換、ii) Glutamate Detection Reagent によるグルタミン酸の検出により行われます。グルタミン酸脱水素酵素 (GlutDH)、NAD+、レダクターゼ、レダクターゼ基質およびルシフェラーゼを含む Glutamate Detection Reagent をグルタミン酸を含むサンプルに等量加えると酵素カップリング反応が同時に起こります。発光シグナルはサンプルに含まれるグルタミン酸量に比例し、すべてのグルタミン酸が消費されるまで増加し、発光シグナルは安定します。
このアッセイを用いれば、グルタミンとグルタミン酸の両方を測定することができ、グルタミン酸測定のために別のアッセイを行う必要はありません。例えば、グルタミンとグルタミン酸の両方を含むサンプルでは発光シグナルはグルタミンとグルタミン酸トータルの初期濃度に比例します。そのため、グルタミナーゼ酵素を含まない2つめの反応ではグルタミン酸のみを測定することになります。グルタミンレベルはトータルのグルタミン + グルタミン酸のシグナルからグルタミン酸のみのシグナルを差し引くことで求められます。
グルタミンおよびグルタミン酸測定の感度と測定レンジ
利点
様々なサンプル種より迅速に代謝物を測定: 培地、細胞、組織および血漿より測定可能。最小限のサンプル調製ステップだけで、遠心やスピンカラムは不要。
細胞内測定ではウェル内で簡便に前処理が完了
広いダイナミックレンジ: 3桁までの直線性を有しているのでサンプル測定が容易
わずかな変化でも検出: S/Bmax > 300 のアッセイウインドウを持つので発色法や蛍光法によるアッセイよりもわずかな代謝物レベルの変化を検出
サンプルあたりの情報量を最大限に: 同じサンプルより複数の代謝物を測定でき、細胞生存性試験とのマルチアッセイで補正することも可能
SKOV-3 細胞によるグルタミン消費とグルタミン酸分泌
1つのサンプルより複数の代謝産物を測定 !
細胞内のエネルギー状態で重要な4種類の代謝産物 — グルコース、乳酸、グルタミン酸およびグルタミンを発光アッセイ Glucose-Glo™、Lactate-Glo™、 Glutamine/Glutamate-Glo™ および Glutamate-Glo™ Assay で同時並行で測定することができます。 これら4種の発光アッセイすべてにサンプル処理が対応するため4種すべての代謝物を同一サンプルより検出することができます。これらのサンプル種には培地、血漿、血清および組織などが含まれます。以下のデータは Technical Manual TM494 に従い、同じ培養細胞より取得した培地サンプルを用いて代謝産物を測定したものです。
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase |
G884A | 1 × 55μl | 6mg/ml |
Reductase Substrate |
G885A | 1 × 55μl | |
Luciferin Detection Solution |
J135A | 1 × 5ml | |
NAD |
J136B | 1 × 275μl | |
Glutamate |
J139A | 1 × 50μl | |
Glutamate Dehydrogenase |
J141A | 1 × 100μl | |
Glutaminase |
J142A | 1 × 25μl | |
Glutaminase Buffer |
J143A | 1 × 2.5ml |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
Reductase |
G884B | 1 × 275μl | 6mg/ml |
Reductase Substrate |
G885B | 1 × 275μl | |
Luciferin Detection Solution |
J135B | 1 × 50ml | |
NAD |
J136C | 1 × 1ml | |
Glutamate |
J139A | 1 × 50μl | |
Glutamate Dehydrogenase |
J141B | 1 × 1ml | |
Glutaminase |
J142B | 1 × 125μl | |
Glutaminase Buffer |
J143B | 1 × 25ml |
U.S. Pat. Nos. 9,273,343 and 9,951,372, European Pat. No. 2751089, Japanese Pat. No. 6067019 and other patents pending.
Resources
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