Lumit® FcγR Binding Immunoassays
Fcγ受容体の結合を測定
- 洗浄やプレート移し替え不要、「添加・混和・測定」のシンプルなプロトコール
- 1時間以内で結果取得が可能
- 96ウェルまたは384ウェルプレートに対応し、スケーラブルかつハイスループットな運用が可能
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Catalog Number: W7030
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Catalog Number: W7060
Catalog Number: W7061
Catalog Number: W7070
Catalog Number: W7071
Catalog Number: W7080
Catalog Number: W7081
より迅速かつシンプルなFc受容体結合アッセイ
Lumit® FcγR Binding Immunoassay は、ヒトFc受容体と抗体またはFc融合タンパク質との相互作用を測定するための、革新的なホモジニアス（洗浄不要）型競合アッセイです。 Lumit® 免疫アッセイは、NanoBiT® 補完技術に基づいて発光シグナルを生成するシステムです。このアッセイでは、LgBiTで標識されたヒトIgG（Tracer-LgBiT）をトレーサーとして使用し、SmBiTで標識されたヒトFcγ受容体（FcγR-SmBiT）をターゲットとして使用します。抗体アナライトが存在しない条件では、Tracer-LgBiTがFcγR-SmBiTに結合し、最大の発光シグナルが得られます。一方、アナライトサンプル中に未標識のIgGが存在すると、Tracer-LgBiTとFcγRの結合を競合し、濃度依存的に発光シグナルが減少します。このような使いやすい生化学的アッセイは、細胞ベースの機能性バイオアッセイの結果を補完し、オーソゴナルなデータを提供する手段としても活用できます。
Fcγ 受容体の機能
IgGのFc受容体（FcγR）は、造血系由来のさまざまな細胞に発現しており、免疫系における防御機能に寄与しています。これらの受容体は、抗体分子のFc領域（結晶化可能領域）に対する親和性をもつことから、このように呼ばれています。FcγRは、病原体や異常細胞に結合した抗体を認識すると、抗体依存性細胞傷害（ADCC）や抗体依存性細胞貪食（ADCP）などのエフェクター機能を誘導します。さまざまなFcγ受容体は、IgGのサブクラスに対する親和性が異なっており、さらにその結合は、IgG分子の糖鎖修飾パターンによっても調節されます。
注：キットあたりのアッセイ総数は、最終的なウェル容量によって異なります。
標準的なウェル容量の場合：
- 100 アッセイキット：96ウェルプレートで100アッセイ、384ウェルプレートで400アッセイに対応
- 1,000 アッセイキット：96ウェルプレートで1,000アッセイ、384ウェルプレートで4,000アッセイに対応
Lumit® FcγR Binding Immunoassay についての詳細
Nath, N. et al. (2022) A homogeneous bioluminescent immunoassay for parallel characterization of binding between a panel of antibodies and a family of Fcγ receptors. Sci Rep 12, 12185.
シンプルなプロトコル、再現性の高い結果
Lumit® FcγR Binding Immunoassay は、溶液ベースのホモジニアスアッセイで、洗浄やサンプルのプレート移し替えを必要としません。
Lumit® FcγR Binding Immunoassay のしくみ
サンプル中に抗体が含まれない場合、Tracer-LgBiT は hFcγR-SmBiT ターゲットに結合し、最大の発光シグナルが得られます。抗体を含むサンプルでは、非標識 IgG は FcγRターゲットへの結合に対して Tracer-LgBiT と 競合するため、結果として濃度依存的に発光シグナルが低下がします。
アッセイパフォーマンスデータ
Lumit® FcγRI Binding Immunoassayを用いた、抗hCD20アイソタイプの高親和性FcγRIに対する結合性の違いの測定結果 FcγRIと相互作用する抗hCD20 IgG1、IgG2、IgG3、IgG4の代表的な結合曲線を、正規化された発光シグナルとして示す。アナライト（抗体）が存在しない条件（0nM）で得られた最大の発光シグナルを100%とし、各抗体濃度でのシグナルはこの最大値に対する割合として表現した。得られたデータは、IC₅₀を算出するために、1/y²重み付けを用いた4パラメータロジスティック回帰モデルによりフィッティングを行った。
Lumit® FcγRIIIa (V158) Binding Immunoassayを用いて測定した、リツキシマブバイオシミラーのFcγRIIIa（V158）への結合性評価 Control Anti-CD20 IgG1、ウブリツキシマブ（ublituximab）、オビヌツズマブ（obinutuzumab）の代表的な結合曲線を、正規化された発光シグナルとしてプロットしている。アナライト（抗体）が存在しない条件（0nM）で観察された最大発光シグナルを100%と定義し、各抗体濃度でのシグナルはこの最大値に対する割合（%）として表示した。データは、1/y²重み付けを用いた4パラメータロジスティック回帰モデルによりフィッティングを行い、見かけのIC₅₀値を算出した。
Lumit® FcγRIIa Binding Immunoassayを用いて測定した、H₂O₂による酸化処理がヒトIgG3のFcγRIIa（H131）結合に与える影響 Lumit® FcγRIIa結合免疫アッセイを用いて測定した、H₂O₂による酸化処理がヒトIgG3のFcγRIIa（H131）結合に与える影響。ヒトIgG3を3%、1%、0.3%、または0%（コントロール）の最終濃度となるようにH₂O₂溶液に添加し、室温で2時間曝露した後、残留H₂O₂を除去した。各酸化処理済みサンプルについて段階希釈を行い、得られた生発光量（RLU）をIgG3濃度に対してプロットした。各曲線は、1/y²重み付けを用いた4パラメータロジスティック回帰モデルによりフィッティングされ、見かけのIC₅₀値を算出した。
Lumit® FcγRI Binding Immunoassayを用いて測定した、Fc糖鎖除去がFcγRI結合に与える影響 ネイティブなヒトIgGおよびPNGase F処理によって脱糖鎖化されたIgGの代表的な結合曲線を示す。脱糖鎖化処理は、IgG濃度4mg/mlの条件でPNGase FをIgG 20mgあたり1mlの割合で添加し、37℃で一晩インキュベートして実施した。アナライト（IgG）が存在しない条件（0nM）で得られた最大発光シグナルを100%と定義し、各IgG濃度でのシグナルをこの最大値に対する割合（%）として表現した。得られたデータは、1/y²重み付けを用いた4パラメータロジスティック回帰式によりフィッティングを行い、見かけのIC₅₀値を算出した。
Lumit® FcγRIIb Binding Immunoassay FcγRコントロール抗体の代表的な標準曲線を、正規化データとしてプロットしている。正規化発光シグナルは、アナライト（分析対象物質）が存在しない条件で得られた最大発光シグナルを100%とし、アナライト存在下でのシグナルをこの最大値に対する割合（%）として算出した。データは、1/y²重み付けを用いた4パラメータロジスティック回帰式によりフィッティングを行った。
プロトコル
Complete Protocol
製品仕様
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 1 × 60μl |
FcγRIIb-SmBiT |
W703A | 1 × 40μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 10 × 60μl |
FcγRIIb-SmBiT |
W703A | 10 × 40μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111C | 1 × 120μl |
FcγRIIIa (F158)-SmBiT |
W704A | 1 × 30μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111C | 10 × 120μl |
FcγRIIIa (F158)-SmBiT |
W704A | 10 × 30μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 1 × 60μl |
FcγRIIIa (V158)-SmBiT |
W705A | 1 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 10 × 60μl |
FcγRIIIa (V158)-SmBiT |
W705A | 10 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 1 × 60μl |
FcγRIIa (R131)-SmBiT |
W706A | 1 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 10 × 60μl |
FcγRIIa (R131)-SmBiT |
W706A | 10 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 1 × 60μl |
FcγRIIa (H131)-SmBiT |
W707A | 1 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111A | 10 × 60μl |
FcγRIIa (H131)-SmBiT |
W707A | 10 × 20μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 1 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111B | 1 × 10μl |
FcγRI-SmBiT |
W708A | 1 × 25μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 1 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 1 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate A |
VB301D | 10 × 75μl |
Tracer-LgBiT |
W111B | 10 × 10μl |
FcγRI-SmBiT |
W708A | 10 × 25μl |
FcγR Assay Buffer |
W709A | 10 × 25ml |
FcγR Control Antibody |
W710A | 10 × 120μl |
U.S. Pat. Nos. 9,797,889, 9,797,890, 10,107,800 and 11,493,504; European Pat. No. 2970412; Japanese Pat. Nos. 7280842 and 7532562; and other patents and patents pending.
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