Dual-Luciferase® Reporter Assay System

Dual-Luciferase® Reporter (DLR®) Assay Systemは、遺伝子発現の測定値を内部コントロールにより補正し、より正確な定量が行えるアッセイシステムです。2種類のルシフェラーゼレポーター酵素を用いて簡便, 迅速, 高感度なシングル チューブ（シングルウェル） /デュアルレポーター方式に統合しました。細胞ライセートあるいは無細胞系翻訳システムを用いて、2種類のルシフェラーゼ、ホタル（Photinus pyralis）ルシフェラーゼおよびウミシイタケ（Renilla reniformis）ルシフェラーゼを短時間に連続して定量することが可能になりました。この2つのレポーターはattomole （<10^-18）レベルの感度と優れた直線性を示します。添付のPassive Lysis Bufferは、ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼのレポーター酵素を最も安定かつ効率的に溶解するバッファーです。96ウェルプレートに培養された細胞から、短時間でライセートを調製できます。最初にLuciferase Assay Reagent IIを添加して、ホタルルシフェ ラーゼ（“試験” レポーター用）のアッセイを開始します。ホタルルシフェラーゼの測定が終了した後、直ちにStop & Glo® Reagentをサンプルチューブに添加します。ホタルルシフェラーゼが消光すると同時に、ウミシイタケルシフェラーゼ（“内部コントロール” レポーター用）が活性化されます。この連続したアッセイは、自動分注機を使えば約4秒で完了します。

Dual-Luciferase® Assayで最適な結果を得るために、デュアルルシフェラーゼアッセイでのパフォーマンスが確認されたルミノメーターの使用を推奨しています。 このようなルミノメーターはデュアルアッセイ認定ルミノメーター"DLReady™" として表示されています。 "DLReady™ルミノメーターの詳細についてはDLReady™ Validated Luminometers  をご覧ください。

pGL4 Luciferase Reporter VectorはDLR™ Assay System用として開発されており、通常、恒常的に発現するウミシイタケルシフェラーゼベクターと実験用のホタルルシフェラーゼベクターを哺乳動物細胞に共トランスフェクションして使用します。

備考：Cat.# E1960 / E1980にはPassive Lysis Buffer （1x 30ml）が添付されており、これは96ウェルプレート（20μl/ウェル使用時）で10枚分（約1,000ウェル分）に相当します。より多くのLysis Buffer を必要とするアプリケーション（例えば>100μl/ウェル）で使用する場合は、別売のPassive Lysis Bufferを別途購入する必要があります。 

【Q&Aはこちら】
【ガイド】実験目的に適したルシフェラーゼシステムの選び方
【ガイド】整合性、統計的有意性向上のための標準化、タンパク質量による補正との違いなど
【サイテーション】ハイスループットスクリーニングへの応用例（文献紹介）

アッセイの利点

• 内部コントロールのウミシイタケルシフェラーゼ：優れた精度を実現
• シングルウェル フォーマット：サンプルを分けて定量する必要がないため、タイタープレートや時間を節約
• 高感度：低活性プロモーター, 低レベルの発現/制御, 低トランスフェクション効率による低レベルな細胞内発現でも、測定が可能
• 7桁までの直線性：ルシフェラーゼ活性の高いサンプルでも希釈が不要