ProAlanase (Mass Spec Grade)
New Site-Specific Endoprotease that Targets Proline and Alanine
- Cleaves primarily C-terminal to proline and alanine residues
- Active at acidic pH (1–5.5) with a pH optimum of ~1.5
- Short digestion times of 1–2 hours
Catalog Number:
Size
Catalog Number: VA2161
Catalog Number: VA2171
プロテオミクス研究における最新のトリプシン代替酵素
ProAlanase は、タンパク質のプロリンやアラニン残基 C末端側を優先的に切断するエンドプロテアーゼです。真菌 (Aspergillus niger) から分離・精製されたProAlanase は、An-PEP や EndoPro とも呼ばれています。タンパク質を ProAlanaseで消化して得られるペプチドは、質量分析による同定や特性評価に適しています。
トリプシンを用いた消化では、配列の カバー率 が不完全であったり、翻訳後修飾の同定ができないケースなどが起こり得ます。トリプシンと同様に、Lys-C、Asp-N、Glu-C、Arg-Cなどの代替プロテアーゼも荷電残基で切断するため、消化されるタンパク質の領域に偏りが生じます。ProAlanase は、ユニークな非荷電部位でタンパク質を切断するため、プロテオームにおける最新のソリューションとしてご利用いただけます。
「A Proline- and Alanine-specific protease is complementary to trypsin in proteomics applications」のポスターでは、古生物学、リン酸化プロファイリング、 de-novo シーケンシング、ジスルフィド結合マッピングなどの研究への ProAlanase の応用に関するデータが紹介されています。
ProAlanase の C-末端切断特異性. ヒトK562抽出液を、酵素：基質を1：100の割合で用いて、pH1.5で37℃で2時間、ProAlanaseで消化した。ペプチドは、Q-Exactive Plusを用いたLC-MS/MSで分析した。データは Byonic™ ソフトウェアを用いて、酵素を指定せずに検索した。主にプロリンとアラニンのC末端側で切断された。
ProAlanase Featured at US HUPO 2021
Watch the seminar presented at US HUPO 2021 by Dr. Diana Samodova on her collaborative work with Promega using ProAlanase. In the seminar, titled "ProAlanase is an Effective Alternative to Trypsin for Proteomics Applications and Disulfide Bond Mapping", Dr. Samodova discusses her research involving paleoproteomics, histone analysis, de-novo sequencing, and analysis of post-translational modifications (PTMs) including phosphorylation profiling and disulfide bond mapping.
pH1.5で最適な消化
ProAlanaseの性能は、pH1.5で最適な高いペプチド同定率と高いプロリン特異性が示されます。
短いタンパク質消化時間で最適なパフォーマンス
通常、ProAlanase の最適な消化効率と特異性は、短い消化時間で観察されます。消化時間を延長しても、明らかな消化効率の向上は見られず、特異性が失われる可能性があります（左）。
ProAlanase は低 pH でのジスルフィド結合マッピングに有用
ProAlanase が最も効果を発揮する低pH環境では、ジスルフィド結合のスクランブルや、脱アミドなどの人工的な非酵素的翻訳後修飾（PTM）を最小限に抑えることができます。
さらに、超酸性の pH は NISTmAb IgG の効果的な変性剤として作用し、塩酸グアニジンのような変性剤を追加することなく、ヒンジ以外のすべてのジスルフィド結合領域の効率的な消化と割り当てを可能にしました。トリプシンを用いて pH8.0 の同様の非変性条件下で消化すると、消化率が悪く、わずかなジスルフィド結合しか割り当てられませんでした。
参考文献: Samodova, D. et al. (2020) ProAlanase is an effective alternative to trypsin for proteomics applications and disulfide bond mapping. Mol Cell Proteomics 19(12), 2139–56.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
ProAlanase, Mass Spec Grade |
VA216A | 1 × 5μg | 0.2μg/μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Concentration |
|---|---|---|---|
ProAlanase Plus, Mass Spec Grade |
VA217A | 1 × 15μg | 0.5μg/μl |
Related Products
類似製品
rAsp-N, Mass Spec Grade
Cleavage site: N-terminal of Asp. Optimal pH: 6–9.
VA1160
Arg-C, Sequencing Grade
シークエンシンググレードのプロテアーゼ：単独あるいは他のプロテアーゼとの組み合わせて質量分析に
V1881
rLys-C, Mass Spec Grade
異性高くリジン残基のC末端側を切断します。タンパク質分解に抵抗性を持つタンパク質に対して消化増進に使用される8M尿素などのタンパク質変性条件下でもタンパク質分解活性を保持します。
V1671
Glu-C, Sequencing Grade
アスパラギン酸またはグルタミン酸残基のC末端を切断、至適pH域は 4.0-9.0
V1651
