rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit
ペプチドマッピングおよびプロテオミクスのためのリコンビナントキモトリプシン
- チロシン（Tyr）、フェニルアラニン（Phe）、ロイシン（Leu）に対する高い切断特異性
- 非特異的切断の排除
- トリプシンの混入なし
- 自己消化に対する高い耐性によるクリアなペプチドマップ
- ロット間での一貫したパフォーマンス
- 安定性維持にカルシウムを必要としない
- ペプチドマッピングワークフロー向けに設計・最適化された酵素
Catalog Number:
Size
Catalog Number: CS333204
Catalog Number: CS333205
質量分析に最適化されたキモトリプシン：切断特異性・安定性・再現性
キモトリプシンは、ペプチドマッピングやプロテオミクスにおいて、トリプシンを補完する重要なオーソゴナルプロテアーゼとして長年使用されてきました。
しかし、ウシ膵臓から精製された従来のキモトリプシンには、非特異的切断が多いこと、自己消化を起こしやすいこと、カルシウム依存性があること、そしてロット間で性能にばらつきがあるといった課題があります。これらの欠点は、特にバイオ医薬品の規制下における特性解析において、質量分析ワークフローを複雑にしてしまう要因となっています。
当社の新しいリコンビナントキモトリプシン、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit は、従来の課題をすべて解決し、パフォーマンスの新たな基準を確立します。本製品はウシ由来キモトリプシンとは異なるクラスのキモトリプシン様プロテアーゼに属し、Pichia pastoris で発現され、98%以上の高純度に精製されています。高い切断特異性、優れた安定性、再現性を実現するように設計されており、チロシン（Tyr）、フェニルアラニン（Phe）、ロイシン（Leu）のC末端を選択的に切断します。一方で、アラニン、メチオニン、ヒスチジン、スレオニン、バリン、セリン、グリシンなどの残基での非特異的な切断を回避します。さらに、本酵素はトリプトファン（Trp）残基の後で切断しないため、バイオ医薬品における重要な翻訳後修飾であるトリプトファン酸化の正確な解析を可能にします。
従来のキモトリプシンとは異なり、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit は自己消化に対して高い耐性を持ち、安定性を維持するためにカルシウムを必要とせず、さらにトリプシンの混入もありません。rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、単なる改良型キモトリプシンではなく、質量分析ベースのペプチドマッピングおよびプロテオミクスのために初めて設計されたリコンビナントキモトリプシンです。これにより、比類ないペプチドマップの品質と、すべての消化反応における一貫した再現性を実現します。
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitと従来のキモトリプシンの比較
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、非特異的切断を低減し、ペプチド解析の精度を向上させる パネルA：モデル基質を用いた従来のキモトリプシンとrChymoSelect™ MS Grade Protease Kitによる消化のUVクロマトグラムを比較した従来のキモトリプシンでは、多数のセミ特異的および非特異的な切断産物（青矢印）を含む複雑なペプチド混合物が生成された。これに対し、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは特異的切断によるピーク強度が増加し、単純化されたペプチドプロファイルを示した。パネルB︓質量分析に基づく切断特異性の定量結果を示す。従来のキモトリプシンは複数の意図しない部位で切断を行ったのに対し、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitはフェニルアラニン（F）、チロシン（Y）、ロイシン（L）に対して高い忠実性を示し、トリプトファン（W）での切断を回避した。
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、標準的な消化条件下において自己消化に対する高い耐性を示す UPLCクロマトグラムにより、従来のキモトリプシンは50 mM Tris-HCl（pH 7.5）において25 °Cで2時間インキュベートすると、複数の自己消化フラグメント（青矢印）を生成することが示された。一方、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit は同一条件下でも酵素が分解されず、自己消化に対する強化された耐性を示した。
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、トリプトファン残基での切断を回避することで、パニツムマブにおけるW311酸化の解析を容易にする パニツムマブの重鎖に位置するトリプトファン（W311）を含むペプチドを対象とし、従来のキモトリプシンまたはrChymoSelect™ MS Grade Protease Kitで消化後、質量分析による解析を行った。従来のキモトリプシンでは、W311を含む複数の重複したペプチドが生成され、定量や保持時間の同定が複雑になる傾向がある。一方、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、より明瞭なフラグメントパターンを生成し、データ解釈を簡便にするとともに、W311酸化の定量精度を向上させる。
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、トリプシンではカバーされない配列領域におけるシーケンスカバレッジを拡張する リプシンはリシン（K）およびアルギニン（R）残基で切断するが、切断部位が密集している場合にはペプチドが短くなりすぎ、逆にR/Kに乏しく芳香族アミノ酸が多い領域ではペプチドが長くなりすぎることがある。これらの極端なサイズのペプチドは、質量分析で検出されにくい場合がある。たとえば、パニツムマブの重鎖において、トリプシン消化では残基317〜347の領域で断続的なシーケンスカバレッジとなる。これに対し、rChymoSelect™ MS Grade Protease Kitは、フェニルアラニン（F）、チロシン（Y）、ロイシン（L）で効率よく切断し、この領域において適切な長さの連続したペプチドを生成する。これにより、トリプシン消化を補完し、全体的なシーケンスカバレッジを向上させる。
従来型ウシ由来キモトリプシンとリコンビナントrChymoSelect™ MS Grade Protease Kit の主な違い
|
比較項目 |
従来型キモトリプシン（ウシ由来） |
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit |
|
由来 |
ウシ膵臓（動物由来） |
Pichia pastoris (リコンビナント) |
|
切断特異性 |
Tyr, Phe, Trp＋非特異的部位 |
Tyr, Phe, Leu, (Met*) |
|
Trpでの切断 |
あり |
なし |
|
自己消化 |
高い |
なし** |
|
カルシウム依存性 |
あり |
なし |
| トリプシン混入 |
起こり得る |
なし |
| ロット間再現性 |
中程度 |
高い |
| MS 適合性 |
ばらつきあり、ペプチド品質が低い傾向あり |
クリーンなペプチドマップに最適化済み |
*タンパク質に依存します。
**推奨される消化条件下での結果です。
プロトコル
No protocols available
仕様
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
rChymoSelect™ MS Grade Protease (Lyophilized) |
CS333201 | 1 × 25μg |
10X Digestion Buffer |
CS333203 | 1 × 1ml |
Limited Use Label License
BY USE OF THIS MATERIAL, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE.
Researcher may use this material for research use only; no transfer, or commercial use of this material is allowed. Commercial use means any and all uses of this material by a party in exchange for consideration, including, but not limited to
- (1) use in further material manufacture; and
- (2) resale of the material, whether or not such material is resold for use in research. Researcher shall have no right to modify or otherwise create variations or derivatives of the material. No other use of this material is authorized without the prior express written consent of Promega. Notwithstanding the foregoing, researcher may use this material in provision of services, information or data to third parties in exchange for consideration, provided that researcher does not transfer the material. No other use of this material is authorized without the prior express written consent of Promega.
With respect to any uses outside this label license, including any diagnostic, therapeutic, prophylactic or commercial uses, please contact Promega for supply and licensing information. PROMEGA MAKES NO REPRESENTATIONS OR WARRANTIES OF ANY KIND, EITHER EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING FOR MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, WITH REGARD TO THE PRODUCT. The terms of this label license shall be governed under the laws of the State of Wisconsin, USA.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
rChymoSelect™ MS Grade Protease (Lyophilized) |
CS333202 | 1 × 100μg |
10X Digestion Buffer |
CS333203 | 2 × 1ml |
Limited Use Label License
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Researcher may use this material for research use only; no transfer, or commercial use of this material is allowed. Commercial use means any and all uses of this material by a party in exchange for consideration, including, but not limited to
- (1) use in further material manufacture; and
- (2) resale of the material, whether or not such material is resold for use in research. Researcher shall have no right to modify or otherwise create variations or derivatives of the material. No other use of this material is authorized without the prior express written consent of Promega. Notwithstanding the foregoing, researcher may use this material in provision of services, information or data to third parties in exchange for consideration, provided that researcher does not transfer the material. No other use of this material is authorized without the prior express written consent of Promega.
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資料
Featured Resource
Reinventing Chymotrypsin: A Novel Recombinant Analog for Accurate and Reliable Peptide Mapping of Biotherapeutic Proteins
rChymoSelect™ MS Grade Protease Kit demonstrates markedly improved cleavage specificity and resistance to autoproteolysis compared to its commercial counterparts. The novel, non-bovine chymotrypsin offers enhanced peptide mapping performance, which enables broader sequence coverage and more confident identification of post-translational modifications such as tryptophan oxidation.
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