トリプシン
トリプシンは、リジンおよびアルギニン残基のカルボキシル側で特異的に切断するセリンプロテアーゼです。トリプシンの厳密な特異性はタンパク質の同定に不可欠であり、ショットガンプロテオミクス用のペプチドへのタンパク質消化のゴールドスタンダードになっています。
Trypsin Platinum, Mass Spectrometry Gradeは、質量分析とRP-HPLC-UVによる正確なタンパク質特性評価を求めているユーザー向けに設計された組換えプロテアーゼです。Sequencing-Grade Modified TrypsinおよびTrypsin Gold, Mass Spectrometry Gradeは、還元的メチル化によって修飾されており、自己分解に非常に耐性のある高活性で安定した分子となっています。精製されたトリプシンの特異性は、キモトリプシンを不活性化するTPCK処理によってさらに改善されています。
さらに、スピンカラムで消化するためのImmobilized Trypsin、タンパク質分解反応時間を短縮するためのRapid Digest Trypsin、タンパク質分解耐性タンパク質を消化するためのTrypsin/Lys C Mixなど、特定の用途向けに設計された一連のトリプシンを提供しています。
用途に応じた最適なトリプシンを、特長比較で選ぶ
| Sequencing Grade Trypsin & Trypsin Gold | Trypsin/Lys-C | Rapid Trypsin & Rapid Trypsin/Lys-C | AccuMAP Low pH Digestion Kit | Trypsin Platinum | |
|---|---|---|---|---|---|
| 消化効率 | |||||
| 切断特異性 | |||||
| スピード消化 | |||||
| 人為的修飾の無いサンプル調製 | |||||
| 自己消化耐性 | |||||
| アプリケーション | • 一般的なプロテオミクス • ゲル内消化 |
• 困難なタンパク質 • 定量解析 |
• 迅速な結果取得 • ハイスループット/ 自動化 |
• ペプチドマッピング • アーティファクト低減 |
• ペプチドマッピング • 最も高い特異性 |
+ - 使用可能
+++ - 推奨
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プロメガのトリプシン製品概要
トリプシンは、その高いタンパク質分解活性と切断特異性により、質量分析サンプル調製で最も広く使用されているプロテアーゼです。プロメガの高品質トリプシンは、ブタのトリプシンに由来し、最高のタンパク質分解活性と切断特異性を与えるように修飾されています。
Sequencing Grade Modified Trypsin
何千もの論文で参照されているSequencing Grade Modified Trypsinは、最大の特異性を提供するように製造されています。凍結乾燥製品の20μgまたは100μg包装として、または50mM酢酸に溶解した凍結液体として入手できます。再懸濁バッファーが付属するため、使いやすくなっています。
Trypsin Gold and Trypsin Platinum
Trypsin Goldは、最大の消化特異性と自己消化に対する極めて高い耐性を持っています。ゲル内消化と溶液内消化の両方に適したアプリケーションであり、100μgの凍結乾燥包装で販売しています。アプリケーション/機器の互換性を保証するために、質量分析による品質管理のステップが追加されました。
Trypsin Platinumは、質量分析とRP-HPLC-UVによる正確なタンパク質の特性評価を求めているユーザー向けに設計された組換えプロテアーゼです。検出可能な非特異的タンパク質分解活性はありません。新しい化学修飾法は、最大の自己タンパク質分解耐性を保証します。Trypsin Platinumはタンパク質分解効率が高く、動物由来のタンパク質フリーとなっています。
Immobilized Trypsin
Immobilized Trypsinは、さまざまな濃度の精製タンパク質または複雑なタンパク質混合物を消化するための迅速で便利な方法を提供します。消化はスピンカラムでわずか30分で起こり、消化されたペプチドは、コレクションチューブに流出するときに固定化トリプシンから簡単に分離されます。調整可能なプロトコルは、さまざまなタンパク質濃度に簡単に対応し、振とうや水浴は必要ありません。
Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade
伝統的に、トリプシンとLys-Cプロテアーゼは、タンパク質分解耐性タンパク質を消化するために組み合わせて使用されます。Trypsin/Lys-C Mixは、Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec GradeとrLys-C, Mass Spec Gradeのユニークな混合物であり、標準的な消化条件で、トリプシン単独よりも溶液中のタンパク質またはタンパク質混合物の消化を改善し、ペプチドの回収率を高め、その結果としてより良いタンパク質定量を可能にします。
多くのタンパク質は、タイトなコンフォメーションのためにトリプシンに耐性があります。タンパク質の変性はタンパク質分解を可能にしますが、トリプシンもこれらの条件下では不活性です。Trypsin/Lys-C mixは、強力な変性条件下でも活性を維持し、トリプシンの活性を阻害する混入物に耐性があるため、タンパク質分解に耐性があるタンパク質の消化も可能にします。
Rapid Digestion – Trypsin and Rapid Digestion – Trypsin/Lys-C Kits
トリプシン分解の1つの欠点はサンプル調整時間が長くかかることであり、4時間から一晩に及びます。効率的に消化を行うには、まず、尿素やグアニジンなどの界面活性剤または変性剤を使用して基質となるタンパク質をアンフォールドする必要があります。ただし、このような化学物質は負の副作用を引き起こす可能性があり、通常は分析前に除去する必要があります。 LC-MS分析用のサンプルの準備に必要な時間を短縮するために、最小限のプロトコルステップで迅速かつ効率的な分解を簡単に実現できる最適化されたプロトコルを開発しました。
Rapid Digestion – TrypsinおよびRapid Digestion – Trypsin/Lys-C Kitsは、70°Cでのタンパク質消化により、タンパク質分解反応時間を劇的に短縮します。使いやすいプロトコルは、高速、効率的、柔軟性があり、幅広いサンプル量とタンパク質濃度に対応します。消化は溶液内で完了します。酵素はビーズに固定化されていないため、プロトコルには、ビーズを除去するために迅速な振とうやオフラインフィルタリングを行うといった厳密な要件はありません。化学変性剤、特別な実験装置、またはオフラインの脱塩は必要ないため、LC-MSのサンプルクリーンアップは不要であり、準備時間が短縮され、サンプルの損失が減少します。
