DNA/RNAクリーンアップ・濃縮
PCR産物や制限酵素消化後のDNAは、反応成分から精製することで、ヌクレオチド、プライマー、その他の下流アプリケーションの妨げとなる小分子を除去するのが一般的です。ここに掲載されている製品は、PCR反応液やゲルからのDNAまたはRNA断片の精製・濃縮、あるいは希薄な溶液からのDNAまたはRNAの濃縮に柔軟に対応できる選択肢を提供します。
Wizard® SV Gel and PCR Clean-Up Systemは、アガロースゲルからのDNA断片の抽出および精製、またはPCR増幅反応液から直接DNAを精製するためのシステムです。ReliaPrep™ RNAおよびDNA Clean-Up and Concentration System は、低濃度サンプルを迅速かつ簡便に濃縮するプロトコルとして使用できるほか、増幅反応液やゲルからのDNAまたはRNAの精製にも対応しています。精製または濃縮されたDNAは、その後の操作なしで、シーケンシング、クローニング、標識、制限酵素消化、あるいはin vitro転写・翻訳反応に使用できます。
Wizard® MagneSil® Sequencing Reaction Clean-Up Systemは、シーケンシング反応の精製を磁気ビーズベースで簡便に行えるシステムであり、ハイスループット用途にも容易にスケールアップ可能です。
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DNA/RNA クリーンアップ・濃縮の概要
DNA断片やPCR産物の精製・濃縮は、in vitro反応液の成分やアガロースゲル断片からDNAを分離する操作です。多くの場合、PCR増幅や制限酵素消化の反応後には、プライマー、タンパク質、塩類などが残存しており、これらが後続の解析に悪影響を及ぼすことがあります。
DNA断片のクリーンアップは、下流アプリケーションの効率を向上させる効果があります。たとえば、PCR増幅反応中に生じる非特異的産物やプライマーダイマーは、後続のTベクタークローニングにおいて目的のPCR産物とライゲーション反応で競合し、ポジティブクローンの出現頻度が低下する原因となります。
サンガーシーケンシングでは、反応後に一部の成分を除去しないと、データ解析に支障をきたすことがあります。たとえば、バッファー中の塩は電気泳動において異常な移動を引き起こし、未反応の蛍光標識ターミネーターやそれに類する化合物は、シーケンシング伸長産物からの正確なシグナルを妨害します。
他のDNAやRNAの精製系と同様に、断片の精製やDNA/RNAの濃縮を目的とした製品は、通常、シリカやセルロースを含む膜・レジン・磁気ビーズなどに核酸を吸着させ、洗浄・溶出のステップを経る構造となっています。
