プラスミド精製

プラスミドは、クローニング、トランスフェクション、無細胞転写/翻訳反応、DNAシーケンスなど、多くのアプリケーションで使用される一般的な研究ツールです。ほとんどのプラスミド精製システムは、改変アルカリ溶解法を使用して細菌細胞を溶解した後、急速な中和ステップでプラスミドを再アニーリングします。ゲノムDNAは再アニーリングしません。プラスミドはカラムに結合することにより精製されます。通常、カラムはアルコールを含む溶液で洗浄して不要物質を除去し、プラスミドDNAは適切なバッファーで溶出します。この「結合、洗浄、溶出」手順は、シンプルで迅速なプロトコルへの高い要望に応えるため長年にわたって改善されており、高純度のプラスミドDNAを高収量で得ることができます。

エンドトキシン（リポ多糖またはLPS）は、すべてのグラム陰性菌の細胞壁成分です。エンドトキシンはin vivoで哺乳類の免疫システムの強力な刺激因子であり、組織培養細胞の生存率を低下させ、in vitroでのトランスフェクション効率を阻害する可能性があります。最大限の一貫性を持たせるため、さまざまな細胞株をトランスフェクトする場合は、エンドトキシンをできるだけ含まないプラスミドDNAを使用するのが最適です。