NanoBRET® TE E3 Ligase Vectors

Part Numbers: N2741, N2751, N2761

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NanoBRET™TE E3 リガーゼアッセイ用の NanoLuc®E3リガーゼ融合ベクターおよびDDB1発現ベクター

  • E3 リガーゼ CRBN または VHL タンパク質と融合したNanoLuc® ルシフェラーゼを発現するベクターでそのままトランスフェクション可能
  • DDB1タンパク質を発現するベクターでそのままトランスフェクション可能
  • NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assay(CRBN または VHL)とともに本ベクターを使用して、E3リガーゼと化合物の結合を測定

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選択製品のカタログ番号: N2741

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NanoBRET® TE E3 Ligase Vectors
NanoLuc®-CRBN/20µg
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生細胞における E3 リガーゼターゲットエンゲージメントの研究

PROTACや分子糊などの低分子を介したタンパク質分解は、複数のステップによって制御されます。最初のステップでは、低分子分解誘導化合物が細胞に侵入し、 E3 ユビキチンリガーゼおよび標的タンパク質に結合します。 NanoBRET™ Target Engagement (TE) Intracellular E3 Ligase Assays は、  E3 ユビキチンリガーゼタンパク質であるセレブロン(CRBN)またはフォン・ヒッペル・リンドウ病腫瘍抑制因子(VHL)に対する化合物の結合性または親和性を生細胞で測定することができます。さらに、アッセイは、化合物の細胞内利用可能性を定量するために使用することもできます。これらのアッセイは、生細胞内で分子の近接度を測定するために設計されたエネルギー伝達技術である NanoBRET™ テクノロジーをベースにしています。

NanoLuc®E3 リガーゼ融合ベクターは、NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assay のエネルギードナーとなるように設計されています。これらのアッセイのエネルギーアクセプターは、NanoLuc®E3リガーゼ融合タンパク質に結合する細胞透過性の蛍光 NanoBRET™トレーサーです。E3 リガーゼと融合しているNanoLuc®にトレーサーが近接すると、NanoBRET™シグナルが発生します。次に、細胞にテスト化合物を添加すると、E3リガーゼに結合することでNanoBRET™ シグナルが用量依存的に減少します。このデータにより、標的 E3 リガーゼタンパク質に対する分解誘導化合物の細胞内親和性の定量が可能になります。

NanoLuc®-CRBN 融合ベクター

NanoLuc®-CRBN Fusion Vector には、NanoLuc®ルシフェラーゼコード領域のC末端に融合したヒトE3リガーゼコンポーネントセレブロン(CRBN)のコード領域が含まれています。NanoBRET™ Target Engagement (TE) Intracellular E3 Ligase Assay CRBNを用いた CRBNターゲットエンゲージメント分析を行うために、ベクターをさまざまな細胞株にトランスフェクトすることができます。このアッセイでは、NanoLuc®-CRBN Fusion Vector を DDB1 Expression Vector(N2761)とともに使用することをお勧めします。NanoLuc®-CRBN FusionVector はそのままトランスフェクションに使用することができます(Transfection-Ready)。CMV プロモーターは、完全長の NanoLuc®-CRBN 融合タンパク質の発現を駆動します。詳細については、 NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assays を参照してください。

NanoLuc-CRBN Fusion Vector

NanoLuc®-CRBN Fusion Vector sequence text file.

VHL-NanoLuc® 融合ベクター

VHL-NanoLuc®FusionVectorには、NanoLuc®ルシフェラーゼコード領域のN末端に融合したヒトフォンヒッペルリンダウ病腫瘍抑制因子E3リガーゼ(VHL)のコード領域が含まれています。NanoBRET™ Target Engagement (TE) Intracellular E3 Ligase Assay VHL を用いた  VHL ターゲットエンゲージメント分析のために、ベクターをさまざまな細胞株にトランスフェクトすることができます。VHL-NanoLuc®Fusion Vector はそのままトランスフェクションに使用することができます(Transfection-Ready)。CMVプロモーターは、完全長の VHL-NanoLuc®融合タンパク質の発現を駆動します。詳細については、NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assays  を参照してください。

VHL-NanoLuc Fusion Vector

VHL-NanoLuc® Fusion Vector sequence text file.

DDB1 発現ベクター

DDB1 Expression Vector には、E3ユビキチンリガーゼ複合体の成分である human DNA damage-binding protein 1(DDB1)のコード領域が含まれています。DDB1 Expression Vector は、NanoLuc®-CRBN Fusion Vector(N2741)および NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assay CRBN とともに使用するように設計されています。DDB1 Expression Vector はそのままトランスフェクションに使用することができます。CMVプロモーターは、完全長の DDB1 タンパク質の発現を駆動します。詳細については、  NanoBRET™ TE Intracellular E3 Ligase Assay を参照してください。

DBB1 Expression Vector

DDB1 Expression Vector sequence text file.

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製品仕様

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選択製品の構成品内容

Item Part # Size Concentration

NanoLuc®-CRBN Fusion Vector

N274A 1 × 20μg 1μg/μl

分析証明書

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使用制限

For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

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パテントおよび免責条項

NanoLuc® ORF TE Vector Limited Use Label License

BY USE OF THIS PRODUCT, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE. If researcher is not willing to accept the terms of this label license, and the product is unused, Promega will accept return of the unused product and provide researcher with a full refund.

Researcher may use this product for research use only; no transfer or commercial use of this product is allowed. Commercial use means any and all uses of this product by a party in exchange for consideration, including, but not limited to (1) use in further product manufacture; (2) use in provision of services, information or data; and (3) resale of the product, whether or not such product is resold for use in research. Researcher shall have no right to modify or otherwise create variations of the nucleotide sequence of the luciferase gene. No other use of this product is authorized without the prior express written consent of Promega.

In addition, researcher must:
(1a) use Nano-Glo®-branded luminescent assay reagents (LARs) for all determinations of luminescence activity of this product; or
(1b) contact Promega to obtain a license for use of the product with LARs not manufactured by Promega.

For uses of this product (NanoLuc® ORF Vector) for energy transfer (such as bioluminescence resonance energy transfer), researcher must:
(2a) use NanoBRET®-branded luminescent assay reagents (LARs; e.g., NanoBRET® Nano-Glo® Substrate), Intracellular TE Nano-Glo® Substrate/Inhibitor or Intracellular TE Nano-Glo® Vivazine®/Inhibitor for all determinations of luminescent activity; and
(2b) use NanoBRET®-branded energy acceptors (e.g., NanoBRET® tracers, NanoBRET® dyes, BRET-optimized HaloTag® ligands) for all determinations of energy transfer activity; or
(2c) contact Promega to obtain a license for use of the product for energy transfer assays using energy acceptors not manufactured by Promega. No license is needed if the energy transfer acceptor is a genetically encoded autofluorescent protein.

With respect to any uses outside this label license, including any diagnostic, therapeutic, prophylactic or commercial uses, please contact Promega for supply and licensing information. PROMEGA MAKES NO REPRESENTATIONS OR WARRANTIES OF ANY KIND, EITHER EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING FOR MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, WITH REGARD TO THE PRODUCT. The terms of this label license shall be governed under the laws of the State of Wisconsin, USA.

U.S. Pat. Nos. 8,557,970, 8,669,103, 9,777,311, 9,840,730, 9,951,373, 10,233,485, 10,633,690, 10,774,364, 10,844,422, 11,365,436, 11,661,623, 11,667,950; European Pat. Nos. 2456864, 2635595, 2990478, 3181687, 3409764; Japanese Pat. Nos. 6038649, 6155424, 6227615, 6374420, 6539689; and other patents and patents pending.

製品仕様

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選択製品の構成品内容

Item Part # Size Concentration

VHL-NanoLuc® Fusion Vector

N275A 1 × 20μg 1μg/μl

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NanoLuc® ORF TE Vector Limited Use Label License

BY USE OF THIS PRODUCT, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE. If researcher is not willing to accept the terms of this label license, and the product is unused, Promega will accept return of the unused product and provide researcher with a full refund.

Researcher may use this product for research use only; no transfer or commercial use of this product is allowed. Commercial use means any and all uses of this product by a party in exchange for consideration, including, but not limited to (1) use in further product manufacture; (2) use in provision of services, information or data; and (3) resale of the product, whether or not such product is resold for use in research. Researcher shall have no right to modify or otherwise create variations of the nucleotide sequence of the luciferase gene. No other use of this product is authorized without the prior express written consent of Promega.

In addition, researcher must:
(1a) use Nano-Glo®-branded luminescent assay reagents (LARs) for all determinations of luminescence activity of this product; or
(1b) contact Promega to obtain a license for use of the product with LARs not manufactured by Promega.

For uses of this product (NanoLuc® ORF Vector) for energy transfer (such as bioluminescence resonance energy transfer), researcher must:
(2a) use NanoBRET®-branded luminescent assay reagents (LARs; e.g., NanoBRET® Nano-Glo® Substrate), Intracellular TE Nano-Glo® Substrate/Inhibitor or Intracellular TE Nano-Glo® Vivazine®/Inhibitor for all determinations of luminescent activity; and
(2b) use NanoBRET®-branded energy acceptors (e.g., NanoBRET® tracers, NanoBRET® dyes, BRET-optimized HaloTag® ligands) for all determinations of energy transfer activity; or
(2c) contact Promega to obtain a license for use of the product for energy transfer assays using energy acceptors not manufactured by Promega. No license is needed if the energy transfer acceptor is a genetically encoded autofluorescent protein.

With respect to any uses outside this label license, including any diagnostic, therapeutic, prophylactic or commercial uses, please contact Promega for supply and licensing information. PROMEGA MAKES NO REPRESENTATIONS OR WARRANTIES OF ANY KIND, EITHER EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING FOR MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE, WITH REGARD TO THE PRODUCT. The terms of this label license shall be governed under the laws of the State of Wisconsin, USA.

U.S. Pat. Nos. 8,557,970, 8,669,103, 9,777,311, 9,840,730, 9,951,373, 10,233,485, 10,633,690, 10,774,364, 10,844,422, 11,365,436, 11,661,623, 11,667,950; European Pat. Nos. 2456864, 2635595, 2990478, 3181687, 3409764; Japanese Pat. Nos. 6038649, 6155424, 6227615, 6374420, 6539689; and other patents and patents pending.

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DDB1 Expression Vector

N276A 3 × 20μg 1μg/μl

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