pGEM®-T Vector Systems
Convenience for Cloning PCR Products
- Insert excision with a BstZI single digest
- Ligation can be completed in 1 hour at room temperature
- Available with or without competent cells
Catalog Number:
Size
Add competent cells
Catalog Number: A3600
Catalog Number: A3610
青/白スクリーニングによる効率的なTベクタークローニング
pGEM®-T Vector System は、特定の耐熱性ポリメラーゼによって増幅されたPCR産物のクローニングに便利なシステムです。これらのポリメラーゼは、鋳型に依存しないかたちで、増幅断片の3´末端にデオキシアデノシン（A）を1つ付加する傾向があります。pGEM®-T Vectorは、ライゲーション反応にすぐに使用できるように調製されており、pGEM®-5Zf(+)ベクターをEcoRVで切断し、両端に3´末端のチミジン（T）を付加することで作製されています。この挿入部位にある3´-Tの突出末端は、ベクターの自己環状化を防ぎ、A突出末端を持つPCR産物と相補的な末端を提供することで、プラスミドへのライゲーション効率を大きく向上させます。
- 迅速なライゲーション: 2X Rapid Ligation Bufferを使用することで、1時間室温反応で完了することが可能です
- 青/白スクリーニング: T7・SP6 RNA polymeraseプロモーターは、β-galactosidaseのα-peptideコーディング領域内のマルチプルクローニング領域両側に位置しています
- f1 複製開始点: 1本鎖DNA合成が可能
さらにお知りになりたい方は、プロトコール＆ガイド(英語)のクローニング または PCR チャプターをご覧ください。
【製品マニュアル】日本語
The pGEM®-T Vector is derived from the pGEM®-5Zf(+) Vector (GenBank® Accession No. X65308). The pGEM®-T Vector was created by linearizing the pGEM®-5Zf(+) Vector with EcoRV at base 51 and adding a T to both 3´-ends. The position of the T is indicated by * in the pGEM®-T Vector Sequence (.txt).
pGEM®-T Vectorでは、T7およびSP6 RNAポリメラーゼプロモーターが、β-ガラクトシダーゼのαペプチドコード領域内にあるマルチクローニングサイト（MCS）を挟んで配置されています。αペプチドへの挿入によってその機能が失活するため、インサートを含む組換えクローンは、指示薬培地での青/白スクリーニングによって直接選別することができます。
このベクターは、f1複製起点（f1 Origin of Replication）を有しているため、一本鎖DNAの調製にも対応しています。
マルチクローニングサイトは、制限酵素BstZIの認識配列で挟まれており、単一酵素による切断でインサートを切り出すことが可能です。また、二種類の制限酵素を用いたダブルダイジェストにより、より柔軟にインサートを切り出すこともできます。
pGEM®-T Vector System IIには、System Iのすべての構成要素に加え、JM109コンピテントセルが含まれています。
参考文献
- Mezei, L.M. and Storts, D.R. (1994) In: PCR Technology: Current Innovations, Griffin, H.G. and Griffin, A.M., eds., CRC Press, Boca Raton, FL, 21.
- Robles, J. and Doers, M. (1994) Promega Notes 45, 19–20.
- Clark, J.M. (1988) Nucl. Acids Res. 16, 9677–86.
- Newton, C.R. and Graham, A. (1994) In: PCR, BIOS Scientific Publishers, Ltd., Oxford, UK, 13.
Protocols
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Available Separately |
|---|---|---|---|
|
pGEM®-T Vector |
A362A | 1 × 1.2μg | |
|
Control Insert DNA |
A363A | 1 × 12μl | |
|
2X Rapid Ligation Buffer |
C671A | 1 × 200μl | View Product |
|
T4 DNA Ligase |
M180A | 1 × 100u |
SDS
Search for SDS分析証明書
使用制限
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.保存条件
See Protocol for detailed storage recommendations.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Available Separately |
|---|---|---|---|
|
pGEM®-T Vector |
A362A | 1 × 1.2μg | |
|
Control Insert DNA |
A363A | 1 × 12μl | |
|
2X Rapid Ligation Buffer |
C671A | 1 × 200μl | View Product |
|
JM109 Competent Cells, High Efficiency |
L200A | 6 × 200μl | |
|
T4 DNA Ligase |
M180A | 1 × 100u |
SDS
Search for SDS分析証明書
使用制限
For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.保存条件
See Protocol for detailed storage recommendations.
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