GoScript™ Reverse Transcriptase

Sensitive Reverse Transcriptase Ideal for Challenging Templates

GoScript™ Reverse Transcriptase は M-MLV ベースで最新のバッファー技術を採用したqPCR用の逆転写酵素です。阻害剤

の存在下でも希少なものから豊富なものまで幅広いレンジの転写物をcDNAに合成できるようにデザインされています。

1つの逆転写酵素、4つの便利なフォーマット

GoScript™ Reverse TranscriptaseはOligo (dT)プライマーまたはランダムプライマー付きの製品や、それらが完全なキットとなった製品、または酵素単品としても入手できます。

GoScript™ Reverse Transcription System

このキットには、GoScript™ Reverse Transcriptase, Reaction Buffer, MgCl2, dNTP Mix, Oligo(dT), Random Primers および Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitorが含まれており、第1鎖cDNAを効率よく合成できるようにデザインされています。トータルRNA、poly(A)+ mRNA または合成転写RNAを始めとするRNAテンプレートを効率よく逆転写します。

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT)

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT)には、第1鎖cDNAを効率よく合成できるように最適化された試薬セットが含まれています。Oligo(dT)のプライミングは、poly(A)RNA分子の3’末端にアニーリングすることにより開始されます。トータルRNAまたはmRNAの逆転写はどんなpoly(A)+RNAからもoligo(dT)プライム産物となります。この方法を使って生成されるcDNAのポピュレーションは単一の逆転写反応からの数多くの異なるダウンストリームアプリケーションを可能にします。

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Random Primers

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Random PrimersはqPCR増幅のために準備される第一ストランドcDNA合成のためのランダムプライマーを含んでいます。ランダムプライマーを用いたプライミングは多彩なRNAテンプレートからのcDNA合成を開始する方法として最も一般的なものです。ランダムプライマーはpoly(A)鎖を持たないRNAや原核生物からのRNAを含むすべてのRNA分子から第一ストランドcDNAをプライミングするために使用されます。

GoScript™ Reverse Transcriptase

GoScript™ Reverse TranscriptaseにはGoScript™ M-MLV逆転写酵素と5X GoScript™ Reaction Bufferが含まれています。

逆転写パフォーマンスデータ

以下データはcDNA合成およびRT-qPCRにおけるGoScript Reverse Transferaseの感度、阻害剤耐性、パフォーマンスを示します。

広いRNAインプット量にわたる効率的なcDNA合成

efficient cDNA Synthesis Over a Range of Input RNA 13870MB-W — GoTaq 2 step RT-qPCR systemを用いたヒトtotal RNA中の6種の異なるターゲットの定量。log倍に変化させた9点のtotal RNAインプット（10 ng/ul to 0.1 fg/ul）を含む反応液を調製し、GoScript逆転写反応を実施した。各逆転写反応産物10 ul (100 ngから1 fg インプットRNAに相当)を希釈せず直接GoTaq qPCRのサンプルとして使用した。それぞれのターゲット特異的なqPCRアッセイを設計し、かつ以下に示すように相対的な発現レベルが異なるターゲットをアッセイに使用した：extremely high (5.8S rRNA), high (ACTB and B2M), moderate (HPRT ) or low (RPL29 and TBP1 )。Total RNA中におけるそれぞれのターゲット量の違いにともないCq値は異なるが、インプット量のlog変化ごとに≅3.3と理論上に近いサイクル数変化を示す結果が得られている。

阻害剤に対する耐性

GoScript reverse transcriptase resistance to inhibitors 8675MB-W — In vitro転写で合成したRNAをoligo dTプライマーを用いて逆転写反応させた（反応条件は各製品説明書に準拠）。エタノール非存在下および存在下（5%、10％および20%）で逆転写反応を行い、合成したcDNAをGoTaq qPCR Master Mixを使用してqPCR解析した。エタノール非存在下と存在下のサイクル閾値の変化を転写物レベルの相対変化＝（2Cqinhibitor -Cqnone）に変換した。データは3回の独立した実験から得られた平均値を表している。

低コピーターゲットの効率的な検出

10倍希釈系列に調製した(1µg - 100pg) ヒトtotal RNA (Agilent, Cat #750500)をGoScript™ Reverse Transcription Mix, Random PrimersもしくはOligo(dT)を用いて逆転写反応させた。合成されたcDNAをGoTaq® qPCR Master Mix (Cat. # A6002)を用いて低コピー遺伝子（APCもしくはTBP）に対するqPCR解析を実施した。検量線から求められる増幅効率はMIQEガイドラインで推奨される範囲内であり、それぞれ99% (APC)および97% (TBP)であった。逆転写酵素なし、およびテンプレートなしのコントロールはいずれも増幅ネガティブであった。

GoScript™ RT Mix Oligo(dT), TBP Variable RNA Input

GoScript reverse transcriptase 14113MA-W

GoScript™ RT Mix, Random Primers, TBP Variable RNA Input

GoScript reverse transcriptase 14114MA-W

感度と特異性

GoScript™ Reverse TranscriptaseとGoTaq® qPCR Master Mixの組み合わせは、9-logオーダーのテンプレート検出を可能にする

Goscript reverse transcriptase dynamic range 8565MB-W-a

Goscript reverse transcriptase titration over 9 logs 8565MB-W-b

GoScript™ Reverse TranscriptaseによるcDNA合成とGoTaq® qPCR Master Mixの組み合わせは、9-logオーダーレンジでテンプレートの検出を可能にする。**Panel A.** ヒトTotal RNA 10 ng中にMS2 RNAを10倍量ずつ（1 × 102 ～ 1 × 1011コピー）スパイクしたRNAテンプレートを調製した。それぞれのサンプルをGoScript™ Reverse Transcriptaseを用いてcDNA合成し、GoTaq® qPCRで増幅した（n=3）。Panel Aの挿入図は、50, 500, 5,000コピーのスタンダードおよび、5コピーサンプル、テンプレートなしサンプルの解離曲線であり、増幅特異性を示している。**Panel B**はそれぞれのサンプルの増幅から求められた検量線を示す。■ = スタンダードサンプル10倍希釈系列; x = 5コピーサンプルの検出結果

プロトコール

Complete Protocol

GoScript™ Reverse Transcriptase Product InformationPDF (109 KB) – English

GoScript™ Reverse Transcription System Technical ManualPDF (8371 KB) – English

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Oligo(dT)PDF (120 KB) – English

GoScript™ Reverse Transcription Mix, Random PrimersPDF (120 KB) – English

Quick Protocols

GoScript™ Reverse Transcription System Quick Protocol FB114PDF (106 KB) – English

選択製品の構成品内容

Item	Part #	Size	Concentration	Available Separately
MgCl₂	A351H	1 × 1.2ml	25mM	View Product
GoScript™ 5X Reaction Buffer	A500C	1 × 600μl
GoScript™ Reverse Transcriptase	A501C	1 × 100μl

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For Laboratory Use. Outside of the United States, this product is intended for research use only unless otherwise stated.

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Item	Part #	Size	Concentration	Available Separately
MgCl₂	A351H	3 × 1.2ml	25mM	View Product
GoScript™ 5X Reaction Buffer	A500D	2 × 1.25ml
GoScript™ Reverse Transcriptase	A501D	1 × 500μl

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Item	Part #	Size	Concentration	Available Separately
MgCl₂	A351B	1 × 750μl	25mM	View Product
GoScript™ 5X Reaction Buffer	A500B	1 × 300μl
GoScript™ Reverse Transcriptase	A501B	1 × 50μl
Oligo(dT)₁₅ Primer	C110B	1 × 50μg	500μg/ml	View Product
PCR Nucleotide Mix	C114G	1 × 200μl	10mM	View Product
Random Primers	C118B	1 × 50μg		View Product
Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor	N251A	1 × 2,500u	40u/μl	View Product
Nuclease-Free Water	P119A	1 × 1,250μl		View Product

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Item	Part #	Size	Concentration	Available Separately
MgCl₂	A351H	1 × 1.2ml	25mM	View Product
GoScript™ 5X Reaction Buffer	A500C	1 × 600μl
GoScript™ Reverse Transcriptase	A501C	1 × 100μl
Oligo(dT)₁₅ Primer	C110B	1 × 50μg	500μg/ml	View Product
PCR Nucleotide Mix	C114G	1 × 200μl	10mM	View Product
Random Primers	C118B	1 × 50μg		View Product
Recombinant RNasin® Ribonuclease Inhibitor	N251A	1 × 2,500u	40u/μl	View Product
Nuclease-Free Water	P119A	2 × 1,250μl		View Product

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Item	Part #	Size	Available Separately
GoScript™ Enzyme Mix	A276A	1 × 100μl
GoScript™ Reaction Buffer, Oligo(dT)	A277A	1 × 200μl
Nuclease-Free Water	P119A	1 × 1,250μl	View Product

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Item	Part #	Size	Available Separately
GoScript™ Enzyme Mix	A276A	2 × 100μl
GoScript™ Reaction Buffer, Oligo(dT)	A277A	2 × 200μl
Nuclease-Free Water	P119A	2 × 1,250μl	View Product

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Item	Part #	Size	Available Separately
GoScript™ Enzyme Mix	A276A	1 × 100μl
GoScript™ Reaction Buffer, Random Primers	A278A	1 × 200μl
Nuclease-Free Water	P119A	1 × 1,250μl	View Product

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Item	Part #	Size	Available Separately
GoScript™ Enzyme Mix	A276A	2 × 100μl
GoScript™ Reaction Buffer, Random Primers	A278A	2 × 200μl
Nuclease-Free Water	P119A	2 × 1,250μl	View Product

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For Research Use Only. Not for Use in Diagnostic Procedures.

Part Numbers: A5003, A5004, A5000, A5001, A2790, A2791, A2800, A2801

最適化された逆転写用酵素

Sensitive Reverse Transcriptase Ideal for Challenging Templates

1つの逆転写酵素、4つの便利なフォーマット

逆転写パフォーマンスデータ

広いRNAインプット量にわたる効率的なcDNA合成

阻害剤に対する耐性

低コピーターゲットの効率的な検出

GoScript™ RT Mix Oligo(dT), TBP Variable RNA Input

GoScript™ RT Mix, Random Primers, TBP Variable RNA Input

感度と特異性

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技術資料

サイテーション

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