Cell-Based Proteasome-Glo™ Assays

培養細胞内プロテアソーム複合体に関連したキモトリプシン様、トリプシン様、力スパーゼ様プロテアーゼ活性を測定するための発光ホモジニアスアッセイシステムで、生物学的関連性の高い結果を得ることができます。これらのアッセイは阻害剤ライブラリーのスクリーニングやプロテアソームにより制御されたタンパク質分解のモニタリングを細胞ベースで行うことができます。Proteasome-Glo™ Cell-Based Assay は細胞への透過性、プロテアソームおよびルシフェラーゼ活性に最適化されたバッファーと発光性のプロテアソーム基質が供給されます。"添加-混和-測定" フォマットの Proteasome-Glo™ Cell-Based Reagent を細胞に加えると、プロテアソームによる基質の切断が起こり、続いてルシフェラーゼ反応により発光シグナルが直ちに生じます。

３種類の発光基質はそれぞれ特定のプロテアーゼ活性（キモトリプシン様活性：Suc-LLVY-aminoluciferin、トリプシン様活性：Suc-LRRaminoluciferin、カスパーゼ様活性：Z-nLPnLDaminoluciferin）のモニタリングに使用します。各基質は各プロテアソーム活性およびルシフェラーゼ活性に最適化されたバッファーシステムに加えます。この試薬を培養細胞に添加するとプロテアソームにより基質が切断され、生じたルシフェリンがルシフェラーゼ発光反応に利用され酵素活性また阻害に応じたグロータイプの発光を生成します。26Sプロテアソームは 複数のタンパク質で構成された 2.5MDa の複合体ですべての真核細胞で観察されます。

Proteasome-Glo™ Cell-Based 3-Substrate System には細胞ベースフォーマットでプロテアソームに関連したタンパク質分解活性を測定する3種類のホモジニアス発光アッセイで構成されています（３種類のアッセイはそれぞれ単品でも販売）。簡略化された手順は操作ステップが低減されているので自動化も可能です。発光アッセイフォーマットでは化合物などに起因する蛍光バックグラウンドシグナルを回避できるため、優れたシグナル / バックグラウンド値を得ることができます。また、本アッセイは384ウェルフォーマットにまでミニチュア化することができます。