タンパク質の定量
発光ベースのHiBiTタンパク質タギングシステムを用いて、細胞内タンパク質の発現量を直接定量できます。HiBiTは、わずか11アミノ酸の小さなペプチドで構成されており、抗体を使用しないシンプルなプロトコルにより、タグ付きタンパク質を検出できます。検出にはルミノメーターのみを使用し、試薬を一度添加するだけで操作が完了します。広いリニアダイナミックレンジにわたって高感度な検出が可能で、内在性レベルのタンパク質にも対応します。HiBiT検出には複数のソリューションが用意されており、タンパク質生物学の研究に多様な可能性を提供します。目的のタンパク質には、クローニングによるタグ付け、またはCRISPR-Cas9による内在性タグ付けのいずれにも対応しており、細胞質タンパク質、分泌タンパク質、膜タンパク質の発現をラベリングおよび検出できます。さらに、抗体や煩雑な洗浄操作を行うことなく、膜上のHiBiTタグ付きタンパク質も検出可能です。
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なぜタンパク質の発現量を定量するのか？
細胞内タンパク質の発現量を把握することは、研究対象である細胞生物学を理解するうえで基本となる要素です。細胞ベースのアッセイにおいては、絶対的な発現量を測定するよりも、異なる実験条件間での相対的な発現量の比較が目的となる場合が多くあります。細胞内タンパク質の定量には、比色法、蛍光法、発光法などさまざまな手法が存在します。多くの場合、これらの手法はゲル電気泳動による分離後の染色や、抗体を用いたウエスタンブロッティングに基づいています。最適な検出手法は、使用可能な抗体の有無、必要とされる定量ダイナミックレンジ、スループット要件、タンパク質の発現レベルなど、複数の要因に基づいて選択されます。特に、検出法の感度はターゲットとするタンパク質の発現量に適合している必要があります。たとえば、細胞内で高発現しているタンパク質であれば、感度の低い比色法でも測定が可能です。一方で、発現量の少ないタンパク質を定量するには、ナノモルレベルまで検出可能な高感度な発光法が必要となる場合があります。これらの要素を総合的に考慮することで、細胞内タンパク質の発現量を定量するために最適な実験手法を選択できます。
