Anti-HiBiT Monoclonal Antibody
Sensitive Antibody-Based Detection of HiBiT-Tagged Proteins
- Use as an orthogonal method to verify bioluminescent results
- Confirm subcellular localization of endogenous HiBiT-tagged proteins in cell pools or clones following CRISPR/Cas9 HiBiT knock-in
- Confirm protein levels and size using classic Western blot detection
- Perform immunoprecipitation of HiBiT-tagged proteins
- Perform FACS analysis on live cells (extracellular HiBiT) or on fixed cells (intracellular HiBiT)
Catalog Number:
Size
Catalog Number: N7200
Catalog Number: N7210
HiBiTタグ付きタンパク質の免疫検出
11アミノ酸のHiBiTペプチドタグは、従来のクローニングやCRISPR/Cas9ゲノム編集を用いて目的のタンパク質に付加することができ、内在性発現条件下でのタンパク質の解析が可能です。HiBiTタグ付きタンパク質は、通常、Nano-Glo® HiBiT検出試薬を添加することで生成される生物発光シグナルを測定し、7 logの線形ダイナミックレンジで変化するタンパク質レベルを正確に測定することができます。特異的で高感度な抗HiBiTモノクローナル抗体が加わったことで、HiBiTタグ付きタンパク質の検出オプションが広がり、従来の抗体ベースの方法でも HiBiTタグの検出方法が可能になり、タンデムタグのアプローチの必要性もなくなります。
ウェスタンブロッティングでサブピコグラムレベルのHiBiTを特異的に検出
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody は高感度かつ特異的で、ウェスタンブロットのバックグラウンドを最小限に抑え、ピコグラム以下のHiBiTタグ付きタンパク質を検出することができます。
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody によるウェスタンブロッティングの感度と特異性. HaloTag®-HiBiTタンパク質をK562哺乳動物細胞ライセ―トを連続希釈し、0.125-4pgのHiBiTタグ付きタンパク質のサンプルを作製した。SDS-PAGE後、ゲルをPVDF膜に移し、1μg/mlの一次抗体、0.2μg/mlのHRP標識二次抗体、ECL Western Blotting Substrateを用いてイムノブロッティングを実施した。画像は60分間露光し、明るさを1,200-15,000にスケーリングした。
CRISPR/Cas9 HiBiTノックイン後の細胞内局在化
Anti-HiBiT mAbを用いた免疫蛍光染色により、HiBiTノックインの細胞プールやクローン細胞の特性を明らかにし、内在性に発現したHiBiTタグ付加タンパク質が予想される細胞内局在を有することが確認できます。
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody を用いたCRISPR編集細胞プールおよびクローンにおけるHiBiTタグ付きタンパク質の免疫蛍光検出. CRISPR/Cas9 編集により、細胞内局在が異なるタンパク質の内在性遺伝子座にHiBiTをノックインした。固定したCRISPR改変クローンまたは細胞プールを、Anti-HiBiT Monoclonal Antibody（赤）とHoechst 色素（青）による免疫蛍光染色で画像化した。パネルA. VCL-HiBiT プール。パネルB. HDAC2-HiBiTクローン。パネルC. SMARCA4-HiBiTクローン。パネルD. HSP90B1-HiBiTプール。
一般的なエピトープタグ抗体と同等以上の性能を示す抗 HiBiT抗体
HiBiTタグ付きタンパク質のウェスタンブロット検出および免疫沈降は、一般的な抗体を使用した場合、FLAG®、Myc、HAタグと同等以上の性能で、HiBiTタグ付きタンパク質を特異的に検出し、効率的にプルダウンすることが可能。
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody を用いたウェスタンブロット検出と一般的なエピトープタグ抗体との比較. HeLa細胞において HSP90B1は、HiBiT単独、またはHiBiTとMyc、HA、FLAG®タグの1コピー、またはFLAG®タグの3コピーでC末端に内在的にタグ付けされた。HSP90B1タグ付加 細胞プールのライセート（10μg）をSDS-PAGEで分離した。PVDF膜に移した後、1µg/ml Anti-HiBiT または Anti-Myc, 0.1µg/ml Anti-HA または 10µg/ml Anti-FLAG® 一次抗体（表示参照）、0.4μg/ml anti-mouse または anti-rat ( anti-HA ブロッティングの場合 ) 二次抗体、ECL基質を用いて5分間露光でウェスタンブロッティングを実施した。HiBiT抗体画像の明るさは 0-29,817、その他の画像は145-2735にスケーリングした。
CRISPR改変細胞プールからのプルダウン効率の比較. CRISPR/Cas9 ゲノム編集を用いて、HSP90B1タンパク質の内在性遺伝子座のC末端にHiBiT、HiBiT-FLAG、HiBiT-3XFLAG、HiBiT-HAまたはHiBiT-Mycをノックインした。CRISPRで編集したHeLa細胞のプールからのライセ―トをバッファーに希釈し、プルダウン比較のために同様のサンプルを調製するために分割した。HSP90B1タンパク質を磁性プロテインG樹脂（Cytiva）で免疫沈降させ、2µgのAnti-HiBiT、FLAG®、HAまたはMyc抗体のいずれかを表示のように使用した。2時間のインキュベーション後、樹脂を洗浄し、SDSローディングバッファーで加熱してタンパク質を溶出させた。細胞溶解液から沈殿したタグ付きHSP90B1タンパク質の量は、Nano-Glo® HiBiT Blotting Systemを使用して検出された。溶出したタンパク質と上清に残ったタンパク質の両方を示す。抗体処理した上清と出発サンプルのシグナル強度の比較により、抗体のタンパク質クリアランス効率が示された。
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody |
N720A | 1 × 100μg |
NOT FOR MEDICAL DIAGNOSTIC USE. FOR IN VITRO USE ONLY. BY USE OF THIS PRODUCT, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE. If researcher is not willing to accept the terms of this label license, and the product is unused, Promega will accept return of the unused product and provide researcher with a full refund.
This product and its derivatives may not be further transferred by the researcher and the purchased quantity of the product may be used only by the researcher, and then only for (1) research use, which may include drug discovery and development research; and (2) use in provision of services, that result in transfer of information or data only. No other commercial use of this product or derivatives is allowed. “Commercial use” means any and all uses of this product or derivatives by a party in exchange for money or other consideration, including, but not limited to, (1) use in further product manufacture; and (2) resale of the product or its derivatives, whether or not such product or derivatives are resold for use in research. Researcher may not attempt to reverse engineer this product by any method including, without limitation, any method of sequencing any portion of the product.
With respect to any uses outside this label license, including, without limitation, any diagnostic, therapeutic, prophylactic or commercial uses, please contact Promega for supply and licensing information. PROMEGA MAKES NO REPRESENTATIONS OR WARRANTIES OF ANY KIND, EITHER EXPRESSED OR IMPLIED, INCLUDING FOR MERCHANTABILITY OR FITNESS FOR A PARTICULAR PURPOSE WITH REGARDS TO THIS PRODUCT. The terms of this label license shall be governed under the laws of the State of Wisconsin, USA.
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Anti-HiBiT Monoclonal Antibody |
N720A | 5 × 100μg |
NOT FOR MEDICAL DIAGNOSTIC USE. FOR IN VITRO USE ONLY. BY USE OF THIS PRODUCT, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE. If researcher is not willing to accept the terms of this label license, and the product is unused, Promega will accept return of the unused product and provide researcher with a full refund.
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