Nano-Glo® HiBiT Blotting System
Fast Luminescent Detection of Proteins on Blots
- Determine protein size and quantify expression on blots
- Protocol requires only minutes, with few processing steps
- Femtogram sensitivity proportional over five orders of magnitude
Catalog Number:
Size
Catalog Number: N2410
ブロッティングによるタンパク質検出を飛躍的にスピードアップ
Nano-Glo® HiBiT Blotting System はブロッティングした HiBiTタグ タンパク質を pg レベル以下の感度で可視化することができます。検出反応では NanoBiT® 発光酵素を形成する HiBiT タグと相補する LgBiT タンパク質を含む検出試薬を使用します。
このブロッティングシステムではニトロセルロース膜上の HiBiT タグタンパク質をたったの約５分で検出することができます（標準的な抗体によるブロッティングプロトコールでは目的タンパク質の検出に数時間）。
【Q&A】 HiBiT
抗体を用いないシンプルな検出ワークフロー
Nano-Glo® HiBiT Blotting System を用いれば、ゲルで分離してメンブレンに転写した HiBiT タグタンパク質を可視化することができます。LgBiT タンパク質およびフリマジン基質を含むブロッティング試薬をメンブレンに直接添加すればHiBiTから発光シグナルが生じます。
標準的な抗体によるブロッティングプロトコールでは数時間かかりますが、このシンプルな検出法ならたったの5分でタンパク質を検出することができます。HiBiTが存在する場所のみが発光するため、バックグラウンドもほとんどありません。
ブロッティングしたタンパク質を高感度に可視化
HiBiTタグを付加したタンパク質は Nano-Glo® HiBiT Blotting System を用いることによりpg 以下でも検出することができます。これは内在の発現レベルのタンパク質でも十分検出できることを示しています。
- HiBiT タグタンパク質の分子量を確認
- スプライスバリアントの発現を同定
- 一過性のトランスフェクションまたは CRISPRによるノックインの迅速なスクリーニング
Signal Proportional Over 5 Orders of Magnitude
一過性トランスフェクションまたは CRISPRによるゲノム編集後の発現確認
一過性トランスフェクションした HeLa 細胞を用いた HiBiT ブロッティング
Nano-Glo® HiBiT Blotting System はHiBiT タグタンパク質の分子量を確認できます。
内在 GAPDHへの HiBiT タギングの確認
効率的なガイドRNAがスクリーニングでき、CRISPR/Cas9 による編集確認も可能
Real-World Example: Using CRISPR Gene Editing to Add HiBiT to Endogenous Genes
Learn how the tiny 11-amino-acid luminescent tag called HiBiT can quantify protein abundance even at endogenous levels. CRISPR-mediated gene editing was used add the HiBiT tag to several endogenous genes, including HIF1α, and quantified protein levels in response to various stimuli.
Protocols
Complete Protocol
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
| Nano-Glo® Luciferase Assay Substrate | N113A | 1 × 200μl |
Nano-Glo® Blotting Buffer |
N242A | 1 × 10ml |
LgBiT Protein |
N401C | 1 × 0.5ml |
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U.S. Pat. No. 9,797,889 and other patents pending.
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