E. coli S30 Extract System for Linear Templates

本製品は、直鎖状の原核生物のDNAをテンプレートとし、転写/翻訳を連続して行うシステムで、Lesleyらの方法を改良したものです。鋳型DNAとしては、スーパーコイル非感受性のプロモーター (lacUV5, tac, λPL (con) や λPRなど)を持つ必要があります。in vitroタンパク質発現には、リボゾーム結合部位が必要です。大腸菌プロモーターの無いDNAからin vitro合成したRNAも本システムで使用することができますが、収量は直鎖状DNAから直接合成したタンパク質の1-10%に減少します。

• 柔軟性： DNAフラグメント, PCR増幅DNA, 重複オリゴヌクレオチド連結体, in vitro転写RNA, 原核生物RNA（RNAの場合はDNAの約100倍量必要）など、様々なテンプレートを使用可能
• 安定性： 発現タンパク質の分解を低減
• 完全性： 転写および翻訳の両反応に必要な全ての成分を含む
• 低バックグラウンド： 内在性のタンパク質合成に起因するバックグラウンドを低減
• 最適化： Premixは、S30 Extractのロットごとに最適化されており、リボヌクレオチド, tRNA, PEP (ホスホエノールピル ビン酸), 塩類などの必要な成分を全て含む (アミノ酸を除く)

• 直鎖状あるいは閉環状DNAのクローン化遺伝子あるいは合成遺伝子の同定
• 新たなクローニング操作をせずに、迅速な遺伝子の構造マッピングが可能
• in vitro変異導入を短時間で確認
• 機能的なドメインやエピトープのマッピングのため、部分的に削除したタンパク質遺伝子を発現
• 適当なE. coliプロモーターを含まないDNAの場合、in vitro転写RNAからタンパク質を発現   

さらに知りたい方は、プロトコール&ガイド（英語）をご覧ください。

1. Lesley, S.A. et al. (1991) J. Biol. Chem. 266, 2632–8.