CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid System
Two-hybrid systemはタンパク質どうしの相互作用をin vivoで検出する非常に強力な方法です。Two-hybrid systemsは、ある特定のDNA配列に結合するDNA結合ドメインと基本転写因子に結合する転写活性化ドメインという、転写因子に存在する分子ドメインからなります。DNA結合ドメインと結合した転写活性化ドメインはTATA boxでRNA polymerase I複合体の会合を促進し、転写を促進させます。CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid Systemにおいて、DNA結合ドメインと転写活性化ドメインは各々のプラスミドから生産されますが、DNA結合ドメインを融合したあるタンパク質X が転写活性化ドメインを融合したタンパク質Yと相互作用すると、これらのドメインが近接し、レポーター遺伝子の転写が行われます。
- 哺乳動物システム:目的に合った哺乳細胞株で相互作用実験が行えるため、タンパク質はよりネイティブに近い状態になります(グリコシレーション、リン酸化、アシル化などの翻訳後修飾を受けやすい)。
- 柔軟性:他のタンパク質解析機能を持つFlexi®ベクターへのタンパク質コード領域の移し変えが容易なフレキシクローニングシステムと従来的なクローニングが行えるオリジナルベクターシステム
- 便利:デュアル-ルシフェラーゼアッセイなど各種ルシフェラーゼ定量試薬から目的に応じたシステムを選択できます。長時間発光タイプを用いれば、タンパク質相互作用のハイスループットスクリーニングが行えます。
- 短期間で解析:トランスフェクション後約2日で結果が得られます(酵母のシステムは3-4日)
- ステイブル:ACTベクターはネオマイシン耐性遺伝子、pGL4.31ベクターはハイグロマイシン耐性遺伝子を持つので、安定なトランスフェクタントを選択できます。
• 期待されるタンパク質間相互作用の確認や相互作用ドメインの同定
• スクリーニング
さらに知りたい方は、プロトコール&ガイド(英語)をご覧ください。
【プロトコル】ベクターマップ&シーケンス
【パフォーマンス】製品概説(原理、新機能、スクリーニング)
【ライセンス】ラベルライセンス
- Sadowski, I. et al. (1988) Nature 335, 563–4.
pACT Vector GenBank® Accession Number AF264723 and vector sequence text file.
pBIND Vector GenBank® Accession Number AF264722 and vector sequence text file.
pG5luc Vector GenBank® Accession Number AF264724 and vector sequence text file.
Protocols
Specifications
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size | Available Separately |
|---|---|---|---|
|
pBIND Vector |
E245A | 1 × 20μg | View Product |
|
pACT Vector |
E246A | 1 × 20μg | View Product |
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pBIND-Id Control Vector |
E247A | 1 × 20μg | View Product |
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pACT-MyoD Control Vector |
E248A | 1 × 20μg | View Product |
|
pG5luc Vector |
E249A | 2 × 20μg |
BY USE OF THIS PRODUCT, RESEARCHER AGREES TO BE BOUND BY THE TERMS OF THIS LIMITED USE LABEL LICENSE. If the researcher is not willing to accept the terms of this label license, and the product is unused, Promega will accept return of the unused product and provide the researcher with a full refund.
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