pFN10A (ACT) Flexi® Vector

CheckMate™/Flexi® Vector Mammalian Two-Hybrid Systemは、2つのタンパク質あるいはドメイン同士の相互作用を確認あるいは評価するためのシステムで、細胞ベースのアッセイを行うためのステイブルな細胞株構築にも使用できます。まず目的の哺乳動物タンパク質をコードする遺伝子をクローニングし、細胞に導入するとネイティブな細胞内環境でタンパク質の発現および翻訳後修飾が起こります。酵母のツーハイブリットシステム同様に目的タンパク質の1つ ("X")をDNA結合ドメインと融合させ、もう片方のタンパク質 ("Y") を転写活性ドメインと融合させるように設計します。pFN10A (ACT) Flexi® Vectorにはヘルペスシンプレックスウイルス VP16 転写活性領域が、FN11A (BIND) Flexi® Vectorには酵母のGAL4 DNA結合領域がそれぞれのクローニングサイト上流に配置されています。また、pFN11A (BIND) Flexi® VectorにはSV40プロモーターの制御下で発現されるウミシイタケルシフェラーゼ遺伝子が組み込まれており、トランスフェク ション効率の補正に利用することができます。第3のベクターpGL4.31[luc2P/Gal4UAS/Hygro] Vectorのminimal TATA box上流にはGAL4結合配列が5回繰り返されており、タンパク質XとＹが相互作用すると、下流に位置するホタルルシフェ ラーゼ遺伝子が転写され、レポーターとして機能します。
オリジナルのCheckMate™ Mammalian Two-Hybrid Systemから進化した新しいフレキシブルクローニングシステムに追加された機能として大きく2つの点が挙げられます。クローニングの容易なフレキシブルクローニングシステムを採用しており、他の機能を有するFlexi® Vectorへのダイレクショナルクローニングが迅速、簡単に行える。 レポーターベクター のルシフェラーゼ遺伝子がS/N比の高い改良型luc2になり、分解配列も付加されているため、応答に優れた実験が可能となり、さらにハイグロマイシン耐性遺伝子も付加されて、安定株の作成を容易にします。

• 哺乳動物システム：目的に合った哺乳細胞株で相互作用実験が行えるため、タンパク質はよりネイティブに近い状態になります（グリコシレーション、リン酸化、アシル化などの翻訳後修飾を受けやすい）。
• 柔軟性：他のタンパク質解析機能を持つFlexi®ベクターへのタンパク質コード領域の移し変えが容易なフレキシクローニングシステムと従来的なクローニングが行えるオリジナルベクターシステム
• 便利：デュアル－ルシフェラーゼアッセイなど各種ルシフェラーゼ定量試薬から目的に応じたシステムを選択できます。長時間発光タイプを用いれば、タンパク質相互作用のハイスループットスクリーニングが行えます。
• 短期間で解析：トランスフェクション後約2日で結果が得られます（酵母のシステムは3-4日）
• ステイブル：ACTベクターはネオマイシン耐性遺伝子、pGL4.31ベクターはハイグロマイシン耐性遺

• 期待されるタンパク質間相互作用の確認や相互作用ドメインの同定
• スクリーニング

For more information, see the Protocols & Applications Guide.

【ライセンス】pGL4ベクターシリーズ