タンパク質精製キット
プロメガでは、手動操作および自動化ワークフローのどちらにも対応した、便利なタンパク質精製用キットおよび試薬を取り揃えています。Hisタグ、GSTタグ、ビオチンタグ、HaloTag®融合タンパク質のアフィニティ精製に対応した製品に加え、Protein AまたはProtein Gとの結合に基づいて抗体を精製する磁気ビーズベースのシステムもご用意しています。さらに、プロテアーゼ阻害剤カクテルや細胞溶解試薬など、タンパク質精製をサポートするアクセサリー製品も取り揃えています。
アフィニティ精製は、細胞溶解液中から組換えタンパク質を濃縮・精製するための強力な手法です。アフィニティタグは、目的タンパク質のN末端またはC末端に付加されます。タグ付き組換えタンパク質は、細胞溶解液または上清から、選択的な結合によって精製され、洗浄と溶出のステップを経て回収されます。精製後、プロテアーゼ処理によりアフィニティタグを切除することも可能です。
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タンパク質精製キットの基礎
タンパク質精製に使用できるアフィニティタグには、さまざまな種類があります。アフィニティタグは、そのサイズ、結合力、タンパク質の可溶性や安定性への影響といった点で大きく異なります。プロメガでは、Hisタグ、GSTタグ、HaloTag®、およびストレプトアビジン／ビオチン結合に対応したアフィニティ精製用キットを取り揃えています。
組換えタンパク質の精製で最も広く使用されているタグは、ポリヒスチジンタグ（Hisタグ）です。Hisタグを用いたタンパク質精製は、ヒスチジン残基とキレート化された固定化金属（ニッケルなど）との親和性を利用して、目的タンパク質を選択的に精製する手法です。Hisタグは、タンパク質精製においていくつかの利点を備えています。たとえば、Hisタグはサイズが小さいため、大きなタグと比べて免疫原性が低く抑えられます。プロメガでは、HisタグおよびHQタグ付きタンパク質を細胞溶解液から精製するためのスケーラブルなHisLink™システムを提供しています。
アフィニティタグであるグルタチオン-S-トランスフェラーゼ（GST）の利用は、GSTがグルタチオンで被覆された固定化マトリックスと強く結合する性質に基づいています。グルタチオン-S-トランスフェラーゼは、多機能性の細胞質タンパク質ファミリーであり、真核生物には内在的に存在しますが、通常は細菌には存在しません。そのため、GSTを用いた精製は、真核系（例：昆虫細胞、哺乳類細胞）での使用には推奨されません。捕捉および洗浄の後、タグ付きタンパク質は可溶性グルタチオンで溶出されます。MagneGST™ Protein Purification ならびにPull-Down System は、GSTタグ付きタンパク質の精製用に設計されたシステムです。
タンパク質精製において、HaloTag®テクノロジーはさまざまなタンパク質発現系と互換性があり、大腸菌、哺乳類細胞、無細胞系で発現されたタンパク質にも適用可能です。HaloTag®融合タンパク質は、アフィニティタグとして優れているだけでなく、可溶性タグとしても高い性能を発揮します。HaloTag®タンパク質に内在性の相同分子が哺乳類細胞および多くの原核細胞に存在しないため、非特異的な相互作用のリスクが低減されます。共有結合によるキャプチャーと高速な結合速度の組み合わせにより、従来のアフィニティタグで見られる平衡依存的な制限を克服し、発現量が低い場合でも効率的に捕捉することが可能です。
ストレプトアビジンとビオチンの相互作用は、その強力な結合力により、さまざまなバイオ分子の検出など、幅広いアプリケーションで利用されています。ストレプトアビジンはビオチンに対して非常に高い結合親和性を持ちます。プロメガでは、ビオチン化抗体の精製に使用できるMagne® Streptavidin Beads、ビオチン化タンパク質の検出に使用できるストレプトアビジン-アルカリホスファターゼ、そしてビオチン化融合タンパク質を作製するためのPinPoint™クローニングシステムをご提供しています。
