Lumit® dsRNA Detection Assay
IVT mRNA サンプル中の二本鎖RNA（dsRNA）汚染を検出・定量するアッセイ
- 高い特異性：一本鎖RNA（ssRNA）やDNAとの交差反応なし
- 修飾ヌクレオチドを含むdsRNA 定量にも対応可能
- シンプルなワークフロー：洗浄ステップや固相化なしで実施可能
- 新規アプローチ：dsRNAの検出に抗体を使用しない方法を採用
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Each assay kit includes its respective dsRNA standard. If you need extra standard, select the option from the dropdown to add additional vials.
Catalog Number: W2041
Catalog Number: W2042
Catalog Number: W2051
Catalog Number: W2052
Catalog Number: W2061
Catalog Number: W2062
Catalog Number: W2071
Catalog Number: W2072
Catalog Number: W2081
Catalog Number: W2082
Catalog Number: W2010
Catalog Number: W2040
Catalog Number: W2050
Catalog Number: W2060
Catalog Number: W2070
Catalog Number: W2080
dsRNAを高感度かつ確実に定量
高品質なin vitro 転写（IVT）産物は、研究およびRNA治療薬の開発において非常に重要です。しかし、IVT過程では二本鎖RNA（dsRNA）の副産物が生成されることがあり、この汚染物質は高い免疫原性など、医薬品や製品に重大な悪影響を及ぼす可能性があります。そのため、dsRNAの高感度かつ定量的な評価は、mRNA治療薬やワクチン製造プロセスの管理と最適化に不可欠です。
Lumit® dsRNA Detection Assayは、サンプル中のdsRNAを定量化するための新技術です。Lumit® Assay テクノロジーは、NanoBiT® ルシフェラーゼの構造的相補性に基づいており、NanoBiT® のサブユニット（SmBiTおよびLgBiT）をdsRNA結合タンパク質に融合しています。dsRNAの存在下で、2つのサブユニットが近接し活性型NanoBiT® ルシフェラーゼを再構成することで、サンプル中のdsRNAの量に比例した発光シグナルを生成します。その結果、定量的かつ特異的なdsRNAの濃度依存的な発光シグナルが得られます。
注：キット1個あたりのアッセイ数は、最終的なウェルあたりの反応液量により変動します。
標準的な反応液量で使用した場合の目安は以下のとおりです：
- 100アッセイキット：96ウェルプレートで最大100アッセイ分、384ウェルプレートで400アッセイ分に対応
- 500アッセイキット：96ウェルプレートで最大500アッセイ分、384ウェルプレートで2,000アッセイ分に対応
dsRNA定量から無駄をなくしたシンプルなプロトコール
本アッセイは溶液中で完結するホモジニアスアッセイです。
- 洗浄やサンプルの移し替え操作は不要
- ハイスループット解析にも対応
配列・サイズに依存しないdsRNAアッセイ
Lumit® dsRNA Detection Assay は、配列やサイズに依存せず、dsRNAを高感度に定量できます。
市販のELISAキットを上回る性能
Lumit® アッセイのリニアレンジは0.04～2.5ng/mlです。一方、市販のdsRNA ELISAキットでは、これらの濃度での正確な定量は困難です。
複雑なIVTサンプル中のdsRNAを検出・定量
Lumit® dsRNA Detection Assayは、複数のRNA種が混在するIVTサンプル中でも、dsRNAを正確に定量できます。
dsRNAの検出
Lumit® dsRNA Detection Assay は、優れたアッセイ内およびアッセイ間の再現性を示し、極めて低い検出限界を実現します。
Lumit® dsRNA Detection Assayを用いて、複数濃度のdsRNAから標準応答曲線を作成 各データポイントは6反復の平均値であり、3回の独立した実験から得られたデータに基づく。測定は GloMax® Discover プレートルミノメーターを用いて行った。本アッセイでは、検出下限（LoD）0.37pg/ml、定量下限（LoQ）1.12pg/ml が算出され、卓越した感度と再現性が示された。
|
Inter-Assay Precision |
|||
| Expected (ng/ml) |
Apparent n=48 (ng/ml) |
Recovery n=48 (%) |
CV (%) |
| 0.125 | 0.130 | 104 | 6.2 |
| 0.5 | 0.494 | 99 | 5.2 |
| 2.0 | 2.069 | 103 | 3.6 |
| Average: 5 | |||
3種類の濃度のdsRNAを、各濃度16反復で3回の独立した実験で測定した。標準曲線に基づく線形補間により、各条件の平均見かけ濃度を算出した。
|
Intra-Assay Precision |
|||
| Expected (ng/ml) |
Apparent n=16 (ng/ml) |
Recovery n=16 (%) |
CV (%) |
| 0.125 | 0.133 | 106 | 3.2 |
| 0.5 | 0.507 | 101 | 4.4 |
| 2.0 | 2.070 | 104 | 3.6 |
| Average: 3.7 | |||
3種類の濃度のdsRNAを、それぞれ16反復で測定した。平均見かけ濃度は、標準曲線に基づく線形補間により算出した。
修飾済みおよび非修飾のdsRNAを Lumit® dsRNAアッセイで検出
さまざまな塩基修飾を含むdsRNAスタンダードに対するLumit® dsRNA Detection Assayの性能評価 各dsRNAスタンダード（非修飾、シュードウリジン、N1-メチルシュードウリジン、5-メトキシウリジン、5-メチルシチジン）はHPLCにより同等の純度まで精製され、3回の独立した実験で測定を実施した。得られた応答は、非修飾dsRNAスタンダードに対して線形回帰を用いて正規化した。すべての修飾および非修飾スタンダードにおいて、アッセイは良好な線形性し、ばらつきは最小限であった。 ※修飾ヌクレオチドを含むサンプルの定量をより正確に行うには、同じ修飾を含むスタンダードの使用を推奨します。
IVT産物中のdsRNAを特異的に検出
The Lumit® dsRNA Detection Assay は、複数のRNA種が混在する IVTサンプル中のdsRNAを高精度に定量できます。
混在するRNA種を含むIVTサンプル中のdsRNAを、Lumit® dsRNA Detection Assayで定量 IVTサンプルに対し、RNase If（ssRNA特異的）またはRNase III（dsRNA特異的）を添加して処理し、総RNA量（QuantiFluor® RNA）およびdsRNA量（Lumit®）を定量した。
- 左図：RNase If sによるssRNAの消化により総RNA量は大きく減少したが、dsRNA検出量には影響がなかった.
- 右図： RNase IIIによりdsRNA が ≤20bp の断片に分解されると、Lumit® dsRNA Detection Assay のシグナルは完全に消失した。
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プロトコル
Complete Protocol
製品仕様
Catalog Number:
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 1 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 1 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 1 × 15μl |
dsRNA Standard |
W204A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 5 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 5 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 5 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 5 × 15μl |
dsRNA Standard |
W204A | 5 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 1 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 1 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 1 × 15μl |
N1-methylpseudouridine dsRNA Standard |
W205A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 5 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 5 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 5 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 5 × 15μl |
N1-methylpseudouridine dsRNA Standard |
W205A | 5 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 1 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 1 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 1 × 15μl |
Pseudouridine dsRNA Standard |
W206A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 5 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 5 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 5 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 5 × 15μl |
Pseudouridine dsRNA Standard |
W206A | 5 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 1 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 1 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 1 × 15μl |
5-methoxyuridine dsRNA Standard |
W207A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 5 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 5 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 5 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 5 × 15μl |
5-methoxyuridine dsRNA Standard |
W207A | 5 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 1 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 1 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 1 × 15μl |
5-methylcytidine dsRNA Standard |
W208A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Lumit® Detection Substrate B |
VB405A | 5 × 160μl |
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 5 × 8ml |
Lumit® dsRNA Sensor-LgBiT |
W202A | 5 × 15μl |
Lumit® dsRNA Sensor-SmBiT |
W203A | 5 × 15μl |
5-methylcytidine dsRNA Standard |
W208A | 5 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
dsRNA Assay Buffer (5X) |
W201A | 1 × 8ml |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
dsRNA Standard |
W204A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
N1-methylpseudouridine dsRNA Standard |
W205A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
Pseudouridine dsRNA Standard |
W206A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
5-methoxyuridine dsRNA Standard |
W207A | 1 × 15μl |
選択製品の構成品内容
| Item | Part # | Size |
|---|---|---|
5-methylcytidine dsRNA Standard |
W208A | 1 × 15μl |
技術資料
注目の技術資料
ポスター：mRNAワクチンにおける二本鎖RNAの高感度かつ特異的な定量のための新規発光アッセイの開発
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