ターゲットセルキリングバイオアッセイ
プロメガが提供するターゲットセルキリング（TCK）バイオアッセイは、様々なバイオ医薬品によって誘発されるターゲットセルキリングを測定するためのシンプル、高感度、特異性の高い方法です。これらのアッセイでは細胞溶解後に発光シグナルを生成し、標準的なルミノメーターを使用して測定できます。
TCKバイオアッセイのしくみ
高速な処理時間、ダイナミックなS/N比、解釈しやすいデータ
HiBiT TCK Bioassayの原理 HiBiT TCKバイオアッセイの原理。細胞傷害性モノクローナル抗体（mAb）および／またはエフェクター細胞を、HiBiT融合タンパク質を発現する標的細胞とインキュベートする。標的細胞が傷害されると、HiBiT融合タンパク質が放出され、細胞外のLgBiTと結合して機能的なNanoBiT®ルシフェラーゼを形成する。発光はルシフェラーゼ基質とGloMax® Discoverマイクロプレートリーダーを用いて測定される。
がん免疫研究のためのTCK細胞株
PBMC
- ADCC適格
- 単一ドナー由来
- FcγR 遺伝子型判定済み
CD8+ T 細胞
- TDCC適格
- 機能試験済み
マクロファージ
- ADCP適格
- 機能試験済み
- FcγR 遺伝子型判定済み
TCK Cell Line Screening
- ViaScript® (HiBiT) TCK Bioassay
- Transient expression of HiBiT
- Identify optimal TCK line
- For blood cancer or solid tumor cell lines
卵巣がん
- OVCAR3 および SKOV3
- 発現： HER2, MSLN, 5T4, MUC16
- MSLNノックアウト株あり
乳腺腺がん
- SK-BR-3
- 発現： HER2, EpCAM
肺がん
- A549
- 発現： EGFR
メラノーマ
- A375
- 発現： HER2, CD70, B7-H3
B細胞リンパ腫・白血病
- Raji (HaloTag-HiBiT)
- Raji (LDH-HiBiT)*
- Ramos
- CD19, CD20, CD22, CD38を発現する細胞株
- 一部標的に対してノックアウト株あり
骨髄性白血病
- U937 および K562
- 発現：CD33, CLL-1
多発性骨髄腫
- H929
- 発現：BCMA, CD38
T細胞性白血病
- T2
- 発現：CD5, CD7, CD30, CD52
*HaloTag®-HiBiT細胞株とLDH-HiBiT細胞株の間で、機能的な差異は観察されていません。
アプリケーション
HiBiT TCKプラットフォームは、さまざまなバイオ医薬品モダリティによって誘導されるT細胞性細胞傷害活性（TCK）を測定するために使用できます。本資料に含まれるデータは、以下の3つの代表的なアプリケーションを示しています：CAR-T細胞による細胞傷害活性、抗体依存性細胞傷害活性（ADCC）、T細胞依存性細胞傷害活性（TDCC）、および抗体依存性細胞貪食活性（ADCP）。
CAR-T細胞による細胞傷害活性
抗体依存性細胞傷害活性（ADCC）
T細胞依存性細胞傷害活性（TDCC）
抗体依存性細胞貪食活性（ADCP）
![Dose-response curve showing the percentage of antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP) as a function of trastuzumab concentration (log₁₀[g/ml]). The curve demonstrates a sigmoidal increase in ADCP, with maximal activity plateauing at higher concentrations.](/-/media/images/resources/figures/19500-19599/19503ma.svg?rev=59862dbe7eed41ae87a775b15ea3eaaa&sc_lang=ja-jp)
HiBiT標的細胞を用いて実証されたCAR-T活性 CAR-19またはGFPコントロールレンチウイルスで形質導入したT細胞を、HiBiT標的細胞（Ramos）と異なるエフェクター：ターゲット（E:T）比で共培養し、24時間インキュベートした。
PBMC ADCC Bioassay を用いて測定されたTCK活性 抗がん抗体医薬リツキシマブによる、PBMCを介したRaji（HiBiT）標的細胞の傷害を示す。
TDCC Assay は、標的細胞に対する特異的な細胞傷害活性を測定する 「Thaw and Use 」のCD8⁺ T細胞（TDCC適格）を、HiBiT発現標的細胞および適切な二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）と組み合わせて用いた。
Macrophage ADCP Bioassay は、標的細胞に対する貪食による細胞傷害活性を定量する 「Thaw and Use」の ADCP適格ヒトマクロファージを、HiBiT標的細胞およびトラスツズマブと組み合わせて、ADCP活性を測定した。
すべてのHiBiT TCK Assayは、当社のBio-Glo-NB™ルシフェラーゼ検出試薬のいずれかを使用しています。
ADCC、TDCC、CAR-T アプリケーション：
Bio-Glo-NB™ TCK Luciferase Assay System
ADCP アプリケーション：
Bio-Glo-NB™ Lytic Luciferase Assay System
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