ルシフェラーゼ・レポーターアッセイ + トランスフェクション

プロモーターや応答配列が遺伝子発現をどのように制御しているかを調べる際、レポーター遺伝子を用いることで理解が容易になります。中でもルシフェラーゼ酵素は、シンプルな発光検出と高感度性により、微小な発現変化を定量できるため、レポーターアッセイに最適なツールです。レポーターアッセイは一般に、プロモーター活性の変化を評価するために使用されますが、それ以外にも、シグナル伝達、タンパク質機能、miRNAによる制御、生体内でのリアルタイム測定など、さまざまな用途に活用できます

レポーターアッセイの基本構成は、レポーター遺伝子を搭載したベクターと、ルシフェラーゼ酵素の活性を光に変換するための検出試薬です。デュアルルシフェラーゼ用の検出試薬は、一方のレポーターのシグナルを消去（クエンチ）してから、もう一方を測定することで、同じサンプルから2つのレポーターを順次測定することができます。2番目のレポーターは一般的に内部コントロールとして使用され、データの正確性を高めます。

ベクターの選定および必要な配列のクローニングが完了したら、通常はトランスフェクション法を用いて培養細胞に導入し、発現後に発光活性を検出します。検出には、細胞溶解タイプ（エンドポイント）試薬または同一細胞内で経時的な変化を測定できるライブセルタイプの試薬が使用されます。さらに、ルシフェラーゼレポーターアッセイは、アポトーシス、代謝など他のアッセイとマルチプレックス化することも可能です。ルシフェラーゼアッセイの測定には、通常プレートベースのルミノメーターが使用されます。