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Vectors: PCR Cloning Change

Name Description Part Number
pGEM-T Easy Vector Systems Open/Close Add
3種類いずれかの制限酵素 (BstZI, EcoRI or NotI ) でインサートの切り出しが可能
室温1時間でライゲーションが可能
コンピテントセルが付属するタイプも用意

pGEM®-T Easy Vector Systemは、従来のpGEM®-T Vector Systemの機能に加え、マルチクローニングサイトの両端にEcoRIとNotIサイトが加えられました。そのため、1種類(NotI、EcoRIあるいはBstZI)の制限酵素を用いるだけで、クローニング後のインサートDNAを簡単に切り出すことがきます。2X Rapid Ligation Bufferの添付により、ライゲーション反応時間を従来のO/Nから1時間に大幅に短縮することができました。また、JM109に加えて現在最も汎用される大腸菌の1つであるDH5αのコンピテントセルが付属する製品(TOYDH5)もございます。大腸菌の形質転換効率は>1×108 transformant/µg pBR322で、SOC培地も含まれています(ただし、トランスフォメーションは10回分)。

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pGEM-T Vector Systems Open/Close Add
制限酵素 BstZI によるインサートの切出し
ライゲーションは室温 1時間で完了
コンピテントセルが付属するタイプも用意

pGEM®-T Vectorは、PCR産物のライゲーション効率を向上させるためのTAクローニングベクターです。2X Rapid Ligation Bufferの添付により、ライゲーション反応時間を従来のO/Nから1時間に大幅に短縮することができました。
本ベクターはEcoR V(平滑末端作成)を用いてpGEM®-5Zf(+) DNAを切断し、両側の3'-末端にチミジンを付加して作成されました。この3'側のチミジン1塩基突出末端(3'-T overhangs)により、PCR産物のライゲーション効率が大幅に改善されます。これは、大部分の耐熱性ポリメラーゼが、テンプレートに依存せず、PCR産物の3'-末端にデオキシアデノシン(A)を付加する性質を持つからです。
pGEM®-5Zf(+) Vectorベクターは、繊維状ファージf1の複製開始点を含むため、ssDNAを合成することができます。また、β-ガラクトシダーゼのα-ペプチドコード領域内にマルチクローニングサイトが位置し、その両側にT7およびSP6 RNAポリメラーゼプロモーターが配列しています。DNA挿入によってα-ペプチドが失活するため、青/白スクリーニングによる簡単な組換え体の選択が可能です。マルチクローニングサイトはErase-a-Base® Systemに合わせてデザインされています。5'-突出末端、平滑末端を形成する制限酵素サイトが内側に位置し、このような接着末端はエキソヌクレアーゼIIIに感受性を持ちます。また、これらの制限酵素サイトの両外側には3'-突出末端を形成する制限酵素サイトを持ち、この接着末端によりエキソヌクレアーゼIIIに対する耐性が生じます。

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