Dual-Luciferase® Reporter (DLR®) Assay Systemは、遺伝子発現の測定値を内部コントロールにより補正し、より正確な定量が行えるアッセイシステムです。2種類のルシフェラーゼレポーター酵素を用いて簡便, 迅速, 高感度なシングル チューブ(シングルウェル) /デュアルレポーター方式に統合しました。細胞ライセートあるいは無細胞系翻訳システムを用いて、2種類のルシフェラーゼ、ホタル(Photinus pyralis)ルシフェラーゼおよびウミシイタケ(Renilla reniformis)ルシフェラーゼを短時間に連続して定量することが可能になりました。この2つのレポーターはattomole (<10-18)レベルの感度と優れた直線性を示します。添付のPassive Lysis Bufferは、ホタルルシフェラーゼとウミシイタケルシフェラーゼのレポーター酵素を最も安定かつ効率的に溶解するバッファーです。96ウェルプレートに培養された細胞から、短時間でライセートを調製できます。最初にLuciferase Assay Reagent IIを添加して、ホタルルシフェ ラーゼ(“試験” レポーター用)のアッセイを開始します。ホタルルシフェラーゼの測定が終了した後、直ちにStop & Glo® Reagentをサンプルチューブに添加します。ホタルルシフェラーゼが消光すると同時に、ウミシイタケルシフェラーゼ(“内部コントロール” レポーター用)が活性化されます。この連続したアッセイは、自動分注機を使えば約4秒で完了します。
Dual-Luciferase® Assayで最適な結果を得るために、デュアルルシフェラーゼアッセイでのパフォーマンスが確認されたルミノメーターの使用を推奨しています。 このようなルミノメーターはデュアルアッセイ認定ルミノメーター"DLReady™" として表示されています。 "DLReady™ルミノメーターの詳細についてはDLReady™ Validated Luminometers をご覧ください。
pGL4 Luciferase Reporter VectorはDLR™ Assay System用として開発されており、通常、恒常的に発現するウミシイタケルシフェラーゼベクターと実験用のホタルルシフェラーゼベクターを哺乳動物細胞に共トランスフェクションして使用します。
備考:Cat.# E1960 / E1980にはPassive Lysis Buffer (1x 30ml)が添付されており、これは96ウェルプレート(20μl/ウェル使用時)で10枚分(約1,000ウェル分)に相当します。より多くのLysis Buffer を必要とするアプリケーション(例えば>100μl/ウェル)で使用する場合は、別売のPassive Lysis Bufferを別途購入する必要があります。
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