Exonuclease III

Exonuclease III は二本鎖DNAに特異的な3′→5′エキソヌクレアーゼです。この酵素はニック、平滑末端、5′-突出末端あるいは3塩基以内の3′-突出末端の3′-OH側からモノヌクレオチドを段階的に除去し、ヌクレオシド-5′-リン酸を生じます。また、内因性の3′-ホスファターゼ活性を持つため、3′-末端にリン酸基を持つDNAも分解します。さらにAP エンドヌクレアーゼおよびリボヌクレアーゼ H活性も有します。Exonuclease III は S1nuclease と組合わせてDNA断片を一方向から削除する場合に使用されます。

• 10X Reaction Buffer添付：660mM Tris-HCl (pH8.0 at 25°C), 6.6mM MgCl₂
• インキュベーション温度により削り取る比率を操作。
• 75°C、10分で不活性化します。

• 直鎖状二本鎖DNAのディレーションセットの調製
• ジデオキシシークエンシングのテンプレートとして使用する一本鎖DNAの調製

1. Weiss, B. (1976) J. Biol. Chem. 251, 1896–901.
2. Rogers, S.G. and Weiss, B. (1980) Meth. Enzymol. 65, 201–11.
3. Henikoff, S. (1984) Gene 28, 351–9.
4. Promega Product Information #9PIM181, Promega Corporation.

Storage Buffer: 20mM Tris-HCl (pH 7.5 at 25°C), 1mM DTT, 100mM KCl, 50% (v/v) glycerol.

Source: Recombinant E. coli strain.

QC Tests: Activity, SDS-PAGE/purity, endonuclease, 3´ overhang protection assay.

Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to produce 1nmol of acid-soluble nucleotides from double-stranded DNA in 30 minutes at 37°C.

Applications

• Generating nested sets of deletions with double-stranded, linear DNA.
• Preparation of single-stranded DNA.