生物発光イメージング

NanoLuc® ルシフェラーゼは、バックグラウンドが低く励起光が不要な、高感度・高輝度の生物発光イメージングを実現します。

細胞や生体内分子プロセスの生物発光イメージングは、正常な生理機能の研究、疾患進行のモニタリング、治療応答の解析において重要な知見をもたらします。NanoLuc® レポーターテクノロジーは、動物個体モデルにおける生物学的プロセスの研究に新たなツールを提供します。高輝度かつコンパクトなこれらのレポーターは、腫瘍増殖の変化の定量から、NanoLuc® レポーターウイルスを用いたウイルスの複製・拡散の可視化まで、幅広い in vivo アプリケーションに対応します。

In Vivo生物発光イメージング

NanoLuc®レポーターは、表在性組織のイメージングにおいて高感度・低バックグラウンドを実現し、深部組織のイベント検出にも有効であることが示されています。これらのレポーターはATP非依存性のため、細胞内・細胞外イベントの両方を in vivo でモニタリングできます。

また、NanoLuc® ベースの BRET レポーターを用いた複数の in vivo イメージング戦略も開発されています。これらの手法では、NanoLuc® の高輝度シグナルを利用して長波長シフト蛍光アクセプタータンパク質を励起することで、深部組織イメージング性能を高めたソリューションを実現しています。

 Nano-Glo® Fluorofurimazine In Vivo Substrate (FFz) は、NanoLuc®ルシフェラーゼ、NanoLuc®融合タンパク質、または再構成NanoBiT®ルシフェラーゼのin vivo検出専用に特化した最適化試薬です。水溶性の本試薬は in vivo における基質バイオアベイラビリティを高め、明瞭なシグナルを実現します。また、in vivo ワークフローに対応した取り扱い要件を備えています。さらに、基質特異性により NanoLuc® とホタルルシフェラーゼを併用でき、デュアルルシフェラーゼ分子イメージング研究が可能となることから、動物個体レポーターモデルの構築においてさらなる選択肢が広がります。

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生きたマウスにおけるルシフェラーゼ活性のイメージング

In Vivo 生物発光イメージング アプリケーション

生きた動物の脳を NanoLuc® ルシフェラーゼでイメージング

Nano-Glo® Cephalofurimazine(CFz9)In Vivo Substrate は、生きた動物の脳における NanoLuc® ルシフェラーゼの検出を可能にします。CFz9 は血液脳関門を通過するよう設計されており、中枢神経系の生理機能・解剖学的構造の非侵襲的探索や、脳への治療薬分布の研究に活用できます。

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Akt 薬剤の薬力学をキナーゼ応答型生物発光インジケーターで解明

In Vivo 生物発光イメージングにより、薬剤の薬力学をリアルタイムかつ非侵襲的にモニタリングできます。生物発光インジケーターを用いることで、生体内における薬剤活性、バイオアベイラビリティ、効果持続時間を追跡できます。このアプローチは、キナーゼ阻害剤をはじめとする治療薬の最適化を加速し、前臨床試験の負担を軽減します。

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生細胞での生物発光イメージング

細胞内局在の制御は、多くのタンパク質の機能やシグナル伝達活性を調節するための重要なメカニズムです。例えば、タンパク質が細胞質から核へ移行することや、タンパク質が細胞膜にリクルートされることは、シグナル伝達経路の活性化における重要なイベントとなり得ます。生物発光イメージング(BLI)は、細胞内タンパク質の局在をモニタリングするために使用でき、繰り返しサンプルを励起する必要なく、生細胞内でのタンパク質動態を直接可視化することが可能です。

生細胞イメージングシステム

関連する生物学的プロセスを特定するためには、生細胞の画像をキャプチャすることが必須です。GloMax® Galaxy Bioluminescence Imagerは、生物発光レポーターの強みとライブイメージングを通じて得られる情報を最大限活用します。これは、NanoBRET、NanoBiT、HiBiT、Lumitなどの NanoLuc® Luciferase 技術のイメージングを可能にするように設計されています。

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NanoBRET Assay Principle
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NanoBRET® NanoGlo® Detection Systemsを使用してタンパク質と小分子の相互作用を検出 NanoBRET®技術は、生物発光ドナーと蛍光アクセプターを利用して、ターゲットエンゲージメントなどの複雑なタンパク質間相互作用を可視化する。PRMT5–NanoLuc®融合タンパク質を発現するHCT116細胞に蛍光小分子トレーサーを補充した(上部パネル)。トレーサー追加前は、発光信号がドナータンパク質にエネルギーが存在することを示す(左;15分間の3分露光)。蛍光トレーサーの結合によりエネルギー移動と蛍光信号が発生する(右;60分間の3分露光)。 ビデオはGloMax® Galaxy 細胞発光イメージャーで撮影した。

Live Cell Substrates

NanoLuc®ルシフェラーゼは、BLI研究におけるタンパク質タグとして非常に適しています。その極めて高い明るさにより、他の発光レポータタンパク質に必要な数分に比べて、露光時間を数秒に短縮できます。さらに、その小さなサイズにより、融合パートナーの正常な生物学的機能や機能性を乱す可能性が低くなります。Nano-Glo® Extended Live Cell Substratesは、シグナルの安定性を向上させ、数時間から数日にわたる長期のキネティックアッセイを可能にします。

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時間経過に伴う標的タンパク質の分解 内因性HiBiTタグ付きGSPT1を発現し、安定的にLgBiTを発現するHEK293細胞を、CC-885degraderまたはDMSOコントロール処理で処理した。Nano-Glo® Vivazine™ Live Cell Substrateを使用してアッセイし、GloMax® Galaxy 細胞発光イメージャーを用いて5時間にわたりイメージングした。
細胞内では、すべてが非常にダイナミックで、毎秒何かが起きています。生物発光ライブセルイメージングがあったからこそ、このダイナミズムを発見できたのです
Li-Fang Chu博士, カルガリー大学、助教

Chu博士の研究室の研究者たちは、生物発光ライブセルイメージングを用いて、ヒト発生初期において振動的に発現する遺伝子の正確なタイミングを初めて観察しました。この研究の詳細は、ブログ: 生物発光ライブセルイメージングによるヒト発生時計の観察でご覧いただけます。


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注目のLab Manager誌記事:生物発光イメージングシステムで細胞の謎を解き明かす

本記事では、生物発光イメージングシステムが実験から得られる知見をどのように深めるかを解説するとともに、研究に最適なプラットフォームを選ぶ際に評価すべき重要な特長を紹介しています。

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生物発光イメージングのアプリケーションを探る

GloMax® Galaxy 細胞発光イメージャーを使って研究者たちがどのようにNanoLuc® ルシフェラーゼ実験をより充実させているかをご覧ください。実績のあるイメージングアプリケーションを探索し、次の発見へのインスピレーションを見つけましょう。

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