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Two-hybrid systemはタンパク質どうしの相互作用をin vivoで検出する非常に強力な方法です。Two-hybrid systemsは、ある特定のDNA配列に結合するDNA結合ドメインと基本転写因子に結合する転写活性化ドメインという、転写因子に存在する分子ドメインからなります。DNA結合ドメインと結合した転写活性化ドメインはTATA boxでRNA polymerase I複合体の会合を促進し、転写を促進させます。CheckMate™ Mammalian Two-Hybrid Systemにおいて、DNA結合ドメインと転写活性化ドメインは各々のプラスミドから生産されますが、DNA結合ドメインを融合したあるタンパク質X が転写活性化ドメインを融合したタンパク質Yと相互作用すると、これらのドメインが近接し、レポーター遺伝子の転写が行われます。

The CheckMate/Flexi Vector Mammalian Two-Hybrid System provides a means to confirm, validate and study suspected interactions between two proteins or domains and can be used to generate stable cell lines for cell-based assays. Developed primarily for mammalian proteins of interest, the system can allow protein expression and post-translational modifications in an environment mimicking the native cell milieu. It is patterned on the yeast two-hybrid system with one protein of interest (X) fused to a DNA-binding domain and the other protein (Y) fused to a transcriptional activation domain. The system relies upon three plasmids that are co-transfected into mammalian cells, each plasmid having unique features. This system differs from the original CheckMate Mammalian Two-Hybrid System in that the vectors are compatible with the Flexi Vector System, which allows directional cloning and rapid, efficient and high-fidelity transfer of protein coding regions between a variety of Flexi Vectors.

pAdVAntage™ Vectorには、Adenovirus Virus-associated I (VAI) RNA遺伝子が挿入されています。この遺伝子により翻訳効率が促進するため、タンパク質の発現量が増加することが示されています。他の発現ベクターと一緒に重トランスフェクションすれば、様々な細胞株で一過性のタンパク質発現量の増加が期待できます。
発現ベクターのトランスフェクションによる目的タンパク質の発現は必ずしも最適な状態で行なわれているとはいえません。トランスフェクションに伴い生成される2本鎖RNA（dsRNA）は、宿主細胞の抗ウイルス防御システム酵素の1つであるdsRNA-activated inhibitor（DAI）を活性化すると考えられています。活性化型DAIは翻訳開始因子elF-2をリン酸化し、翻訳（タンパク質の生産）を休停止させます（1, 2）。
このDAIによる翻訳の阻害は、アデノウイルスVAI RNA (Virus Associated I RNA) により克服することができます。このRNAはpAdVAntage™ Vectorの重トランスフェクション後、RNA polymerase IIIにより合成されます。VAI RNAはDAIに結合し、その活性化を防ぐことにより、翻訳/タンパク質発現を回復させます（2, 3, 4）。

参考資料
1.Farrell, P.J. et al. (1977) Cell 11, 187.
2.Groskreutz, D. and Schenborn, E. (1994) Promega Notes 48, 8.
3.Kitajewski, J. et al. (1986) Cell 45, 195.,br>4.O'Malley, R. et al. (1986) Cell 44, 391.

pCI-neo Mammalian Expression Vectorは、哺乳動物細胞における安定した遺伝子発現に最適な発現ベクターです。抗生物質G418を用いてトランスフェクト細胞を選択すれば、一過性の発現または安定な発現に利用できます。

参考資料
1.Schmidt, E.V. et al. (1990) Mol. Cell. Biol. 10, 4406.
2.Brinster, R.L. et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85, 836.
3.Choi, T. et al. (1991) Mol. Cell. Biol. 11. 3070.
4.Palmiter, R.D. et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88, 478.
5.Carswell, S. and Alwine, J.C. (1989) Mol. Cell. Biol. 9, 4248.

GenBank®/EMBL Accession Number
U47120

pCMVTnT™とpTnT™ Vectorはクローンした遺伝子をin vitroやin vivoで便利に発現させるためにデザインされたベクターです。SP6とT7プロモーターが含まれているため、SP6あるいはT7ベースのin vitro転写/翻訳カップルシステムで発現が可能です。また、RNAファージプロモーターによってin vitroのRNA合成が高効率で行われます。どちらのベクターも5´ β-globin leader sequenceとsynthetic poly(A)30 tailを有し、これらはいくつかの遺伝子の発現を促進することが知られています。
in vivoの発現用に、pCMVTnT™ VectorはCMV enhancer/promoter領域を含み、多くの細胞種において強力な構成的発現が可能となります

このベクターは哺乳類細胞においてN末端にHaloTag®を融合したタンパク質を発現させるためにデザインされました。発現後、HaloTag®融合タンパク質に蛍光HaloTag®リガンドを結合させて、局在や輸送を確かめるための細胞イメージングが可能です。さらに、HaloTag®融合タンパク質は精製も可能であり、相互作用するパートナータンパク質を複合体としてプルダウンすることもできます。
HaloTag®融合ベクターには2種類あり、好みに応じて選べます。
pHTベクターシリーズは従来のクローニング用であり、シンプルなマルチクローニングサイト（MCS）を含むプラスミドです。
pFベクターシリーズはFlexi®ベクタークローニングシステム（インサートを意図した方向にクローニングするシステム）に使用できます。このシステムは2つのレアカッティング制限酵素である SgfIとPmeIを用い、様々なFlexi®ベクター間で迅速、効率的かつ正確にタンパク質のコード領域を移し替えることができ、再シーケンスも必要ありません。
注：サブクローニングにおいてインサートを含まないコロニーのバックグラウンドを低下させるため、Flexi®ベクターは致死遺伝子であるbarnaseを含みます。Flexi® Vector Cloning Systemを用いることで、インサートがbarnase遺伝子ととって代わります。このベクターはインサートを含まない状態では一般的な研究室で使用する大腸菌株で増やすことができません。

http://www.promega.com/products/pm/halotag-technology/kazusa-collection

このベクターは哺乳類細胞においてN末端にHaloTag®を融合したタンパク質を発現させるためにデザインされました。発現後、HaloTag®融合タンパク質に蛍光HaloTag®リガンドを結合させて、局在や輸送を確かめるための細胞イメージングが可能です。さらに、HaloTag®融合タンパク質は精製も可能であり、相互作用するパートナータンパク質を複合体としてプルダウンすることもできます。
HaloTag®融合ベクターには2種類あり、好みに応じて選べます。
pHTベクターシリーズは従来のクローニング用であり、シンプルなマルチクローニングサイト（MCS）を含むプラスミドです。
pFベクターシリーズはFlexi®ベクタークローニングシステム（インサートを意図した方向にクローニングするシステム）に使用できます。このシステムは2つのレアカッティング制限酵素である SgfIとPmeIを用い、様々なFlexi®ベクター間で迅速、効率的かつ正確にタンパク質のコード領域を移し替えることができ、再シーケンスも必要ありません。
注：サブクローニングにおいてインサートを含まないコロニーのバックグラウンドを低下させるため、Flexi®ベクターは致死遺伝子であるbarnaseを含みます。Flexi® Vector Cloning Systemを用いることで、インサートがbarnase遺伝子ととって代わります。このベクターはインサートを含まない状態では一般的な研究室で使用する大腸菌株で増やすことができません。

http://www.promega.com/products/pm/halotag-technology/kazusa-collection