ProAlanase (Mass Spec Grade)

Part Numbers: VA2161, VA2171

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プロリンとアラニンを標的とする新しい部位特異的エンドプロテアーゼ

  • 主にプロリンおよびアラニン残基のC末端を切断
  • 酸性 pH(1~5.5)で活性を示し、最適 pH は 約1.5
  • 短い消化時間(1~2時間)

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選択製品のカタログ番号: VA2161

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ProAlanase (Mass Spec Grade)
5μg
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プロテオミクス研究における最新のトリプシン代替酵素

ProAlanase は、タンパク質のプロリンやアラニン残基 C末端側を優先的に切断するエンドプロテアーゼです。真菌 (Aspergillus niger) から分離・精製されたProAlanase は、An-PEP や EndoPro とも呼ばれています。タンパク質を ProAlanaseで消化して得られるペプチドは、質量分析による同定や特性評価に適しています。

トリプシンを用いた消化では、配列の カバー率 が不完全であったり、翻訳後修飾の同定ができないケースなどが起こり得ます。トリプシンと同様に、Lys-C、Asp-N、Glu-C、Arg-Cなどの代替プロテアーゼも荷電残基で切断するため、消化されるタンパク質の領域に偏りが生じます。ProAlanase は、ユニークな非荷電部位でタンパク質を切断するため、プロテオームにおける最新のソリューションとしてご利用いただけます。

「A Proline- and Alanine-specific protease is complementary to trypsin in proteomics applications」のポスターでは、古生物学、リン酸化プロファイリング、 de-novo シーケンシング、ジスルフィド結合マッピングなどの研究への ProAlanase の応用に関するデータが紹介されています。

ポスターをダウンロード
C-terminal cleavage specificity of ProAlanase.

ProAlanase の C-末端切断特異性. ヒトK562抽出液を、酵素:基質を1:100の割合で用いて、pH1.5で37℃で2時間、ProAlanaseで消化した。ペプチドは、Q-Exactive Plusを用いたLC-MS/MSで分析した。データは Byonic™ ソフトウェアを用いて、酵素を指定せずに検索した。主にプロリンとアラニンのC末端側で切断された。


ProAlanase Featured at US HUPO 2021

Watch the seminar presented at US HUPO 2021 by Dr. Diana Samodova on her collaborative work with Promega using ProAlanase. In the seminar, titled "ProAlanase is an Effective Alternative to Trypsin for Proteomics Applications and Disulfide Bond Mapping", Dr. Samodova discusses her research involving paleoproteomics, histone analysis, de-novo sequencing, and analysis of post-translational modifications (PTMs) including phosphorylation profiling and disulfide bond mapping.

pH1.5で最適な消化

ProAlanaseの性能は、pH1.5で最適な高いペプチド同定率と高いプロリン特異性が示されます。

Optimal protein digestion with ProAlanase is observed at pH 1.5

短いタンパク質消化時間で最適なパフォーマンス

通常、ProAlanase の最適な消化効率と特異性は、短い消化時間で観察されます。消化時間を延長しても、明らかな消化効率の向上は見られず、特異性が失われる可能性があります(左)。

Protein digestion efficiency and specificity of ProAlanase  at short digest times.

ProAlanase は低 pH でのジスルフィド結合マッピングに有用

ProAlanase が最も効果を発揮する低pH環境では、ジスルフィド結合のスクランブルや、脱アミドなどの人工的な非酵素的翻訳後修飾(PTM)を最小限に抑えることができます。

さらに、超酸性の pH は NISTmAb IgG の効果的な変性剤として作用し、塩酸グアニジンのような変性剤を追加することなく、ヒンジ以外のすべてのジスルフィド結合領域の効率的な消化と割り当てを可能にしました。トリプシンを用いて pH8.0 の同様の非変性条件下で消化すると、消化率が悪く、わずかなジスルフィド結合しか割り当てられませんでした。

参考文献: Samodova, D. et al. (2020) ProAlanase is an effective alternative to trypsin for proteomics applications and disulfide bond mapping. Mol Cell Proteomics 19(12), 2139–56.

ProAlanase の査読付き論文を読む
Paper: ProAlanase is an effective alternative to trypsin for proteomics applications and disulfide bond mapping.

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ProAlanase, Mass Spec Grade

VA216A 1 × 5μg 0.2μg/μl

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ProAlanase Plus, Mass Spec Grade

VA217A 1 × 15μg 0.5μg/μl

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